盐酸利多卡因眼用凝胶有关物质方法研究

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1、盐酸利多卡因眼用凝胶有关物质方法研究仲益(江苏省泰州市姜垠中医院江苏姜垠225500)【摘要】目的研究盐酸利多卡因眼用凝胶中的有关物质检查方法。方法HPLC法。结果木方法专属性好，灵敏度度高。结论木方法适合于盐酸利多卡因眼用凝胶中有关物质的检查。【关键词】盐酸利多卡因眼用凝胶物质研究方法【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)20-0028-021仪器与试药1.1仪器Waters2695高效液相色谱仪(Waters2996检测器、Waters2487检测器

2、)Agilentl200高效液相色谱仪(DAD检测器)色谱柱：AgilentTC-C18(4.6×250mm)>汉邦0DS-AJS(4.6×250mm)>月旭AQ-C18(4.6×250mm)1.2试药磷酸二氢钠分析纯南京化学试剂厂磷酸氢二钠分析纯南京化学试剂厂磷酸分析纯南京化学试剂厂甲醇色谱纯美国天地乙睛色谱纯美国天地2产品及现状盐酸利多卡因眼用凝胶厂家：AkornIncorporated,商品名:AkornTM,包装：聚酯滴眼剂瓶装，贮藏：密封避光在15°

3、C〜25°C条件下保存，规格：5ml:175mg,批号:1B33B,有效期至2013年1月。盐酸利多卡因原料BP2009标准详细列出了盐酸利多卡因可能存在的杂质为：杂质A为起始原料2,6■二甲基苯胺，杂质B为起始原料二乙胺部分被氧化后的副反应产物，杂质C为起始原料氯乙酰氯中混入杂质乙酰氯带进的副反应产物，杂质D为起始原料二乙胺中混入的乙胺带进的副反应产物，杂质E为起始原料二乙胺中混入的氨带进的副反应产物，杂质F为起始原料2,6■二甲基苯胺中混入的2,3■二甲基苯胺带进的副反应产物，杂质G为起始原

4、料二乙胺中混入的2-丙胺带进的副反应产物，杂质H为合成利多卡因原料的关键中间体N■氯乙酰基26■二甲苯胺，杂质I为起始原料2,6■二甲基苯胺中混入的2,4・二甲基苯胺带进的副反应产物，杂质J为起始原料2,6■二甲基苯胺中混入的2,5■二甲基苯胺带进的副反应产物，杂质K为起始原料二乙胺中混入的甲乙胺带进的副反应产物。国内外利多卡因原料及制剂均控制“2,6■二甲基苯胺”，其他杂质归入最大单个杂质，实施限量控制。文献［染料产品中23种有害芳香胺的限量及检测方法］显示，在已知的23种有害芳香胺中，包含2

5、,6二甲基苯胺等，长期接触该类物质可能引起具有急性肝中毒、肾损伤及致癌的毒性反应。故研究者结合国内外利多卡因原料及制剂标准，初步确定对盐酸利多卡因眼用凝胶中可能含有的“2,6・二甲基苯胺、N・氯乙酰基・2,6■二甲苯胺”用外标法实施定量限量控制，其他杂质归入最大单个杂质，实施限量控制，并参照BP2009原料标准，用“2,6■二甲基苯胺”及“N■氯乙酰基・2,6■二甲苯胺”的分离度考察系统适用性条件。3方法及结果3.1流动相选择取“盐酸利多卡因”、“乙6■二甲基苯胺（杂质I）”及“N■氯乙酰基・乙

6、6・二甲苯胺（杂质II）”，用流动相制成各为35μg/ml的混合溶液，在检测波长为254nm及230nm的条件下，考察杂质I与杂质II的分离度及盐酸利多卡因峰型，结果表明流动相1条件下杂质与利多卡因的分离度良好，且主峰利多卡因峰形较好。3.2测定波长选择多波长检测数据显示：杂质I、II及盐酸利多卡因在254nm处的吸收均小于在230nm处的吸收，参照盐酸利多卡因将我公司研制的盐酸利多卡因眼用凝胶的有关物质检测波长确定为230nmo3.3供试品浓度选择BP2009原料标准中，有关物质检查供试

7、液浓度为5mg/ml,中国药典2010版原料标准中，有关物质检查供试液浓度为2mg/ml,而眼用凝胶的浓度为35mg/ml,稀释10倍后浓度为3.5mg/ml,以3.5mg/ml的盐酸利多卡因溶液为基础，逐级稀释，测得盐酸利多卡因定量限浓度为1.4μg/ml,约为供试液浓度的1/5000,可见，该浓度下0.02%的杂质可被检出。故研究者确定有关物质检查供试液浓度为3.5mg/mlo3.4专属性考察供试品溶液中主峰保留时间为13.225min,杂质保留时间分别为4.903min>8.027m

8、in,主峰与相邻杂质的分离度为11.84。径苯甲纤维素E4M、氯化钠及空白辅料溶液均在3min前出峰，对杂质及主峰的出峰无影响，专属性强。3.5方法学研究3.5.1杂质I（已知杂质2,6■二甲基苯胺）的方法学研究3.5.1.1定位试验及响应值考察结果显示：2,6■二甲基苯胺与盐酸利多卡因的相对保留吋间为0.646,响应值为4.51。3.5.1.2定量限和检测限取乙6-二甲基苯胺对照品适量,用流动相配成浓度为1.75mg/ml的溶液,将该溶液用流动相逐级稀释成适当浓度进样，定量限按峰高为基线噪音的