仙人掌多糖中单糖组成的气相色谱分析

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1、第7卷第6期甲国食品字加Vol.7No.62007^12^JournalofChineseInsliluicofFoodScienceandTechnologyDee.2007仙人掌多糖中单糖组成的气相色谱分析尤玉如'袁海娜1刘士旺I储小军2('浙江科技学院生物与化学工程学院杭州3100122浙江贝因美科工贸股份有限公司杭州310007)摘要从仙人掌茎中提取多糖•并采用S叩erdexT巴00、SaphacrylS-100HR.SephadexG-100凝胶柱层析法分离得到2个多糖组分(OPSI和OPSII),它们均为化学均

2、一物质；用气相色谱法分析仙人掌多糖OPSI和OPSII的单糖组成,结果表明：OPSI主要由鼠李糖.葡萄糖和半乳糖组成:OPSII主要由岩藻糖、木糖和葡萄糖组成。关键词仙人掌多糖分离气相色谱单糖文章编号1009-7848(2007)06-0136-05仙人掌(Opuntia)为仙人掌科(Cactaceae)仙人掌属】材料和方法植物、野生或栽培，全世界约有250种-役1.1材料仙人掌:购于杭州萧山云祥食用仙人掌开其在我国主要分布于云南.贵州.广东.福建等地。仙人掌的药用历史悠久，具有行气活血.清热解毒功中心。能。仙人掌中含有的

3、仙人掌多糖是其具有多种药用功效标准单糖:L(・)岩藻糖,Sigma产品;D(+)木的原因之一。糖、鼠李糖•国药集团化学试剂有限公司产品;D甘目前国内外对仙人掌多糖的研究才刚刚起步.露糖、上海］白奥生物科技有限公司产品;D-半乳糖,研究内容主要集中于仙人掌多糖的提取和分离，但上海恒信化学试剂有限公司产品;D-葡萄糖•广东较高纯度的仙人掌多糖尚未见报道。对仙人掌多糖光华化学厂产品。的组成.结构以及生理活性等的研究也尚未开展。仪器:AKTApurifier100层析仪(Superdex™对单糖组成的分析是糖类物质硏究中的一项重要

4、内200(10mmx300mm)xSaphacrylS-100HR(l()容。本文采用水提醇沉法提取仙人掌mmx300mm)xSephadexG-100(10mmx300多糖，并通1SSuperdex™200xSaphacrylS-100HR.mm),Amersham).GC-6820Agilent气相色谱仪。SephadexG-100凝胶层析法进行分离、纯化，旨在为仙I・2方法人掌多糖的开发、应用提供依据。121仙人掌粗多糖的制备-5)滤渣新鲜仙人掌一匀浆一＞溶剂浸提一过滤一＞合并滤液一＞减压浓缩一＞除蛋白乙醇沉淀一＞真

5、空冷冻干燥一＞粗多糖1.2.2仙人掌多糖的分离纯化min离心5min,取上清液,过滤,脱气备用。以0.11.2.2.1Superdex™200凝胶柱层析将彳山人掌粗多糖溶解于0」mol/LNaCl溶液中，10000r/mol/LNaCl溶液平衡凝胶柱4h。进样2mL,用0.1mol/LNaCl溶液洗脱,流速1mL/min,2mL/管自动收集,用蔥酮■硫酸法⑹测定多糖含量。以管数收稿日期:2007-03-30为横坐标,吸光值为纵坐标作图。收集、合并主糖基金项目：杭州市科技攻关项目(NO.20051332B21)；杭州市重大科

6、技峰的洗脱液，真空冷冻干燥后得白色多糖粉末，命名招标项目(No.20062911A05)为opsI和opsn0作者简介:尤玉如.男•1957年岀生教授仙人掌多糖中单糖组成的气相色谱分析第7卷第6期1.2.2.2SaphacrylS-100HRxSephadexG-100凝胶柱层析°"将opsisiopsn分别溶解于0.1mol/LNaCl溶液中，经SaphacrylS-100HR、SephadexG-100凝胶柱层析分离，以0」mol/LNaCl溶液洗脱,采用蔥酮-硫酸法测定总糖含量。1.2.3仙人掌多糖的单糖组分分析12

7、3.1标准品的测定冋称取1()mg固体单糖样品、10mg盐酸轻胺.加入0.5mL毗噪，放入90°C水浴中加热反应30min,间歇振荡。取出后冷却至室温,加入0.5mL醋酸酹,90°C下继续反应30min(乙酰化)，反应产物直接作气相色谱分析。记录各标准单糖的保留时间(RT)。1.2.3.2样品的测定丄川①样品的水解：分别称取适量仙人掌多糖OPSI和OPSII粉末于安培瓶中，加入2mol/L三氟乙酸，封管：100°C水浴水解4h,水解液旋转蒸发至干。②水解单糖的衍生化：水解单糖加入20mL毗卩定、3()mg盐酸轻胺,混匀,9

8、0°C137水浴中反应30min,间歇振荡；取出后冷却至室温,加入3mL醋酸酉七90°C下继续反应30min(乙酰化)，反应液旋转蒸发至干,再用3mL氯仿溶解,产物作气相色谱分析。记录各样品单糖的保留时间,并与标准单糖的气相色谱进行比较，确走仙人掌多糖的单糖组成。123.3色谱条件①色谱柱：HP-5MS