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《银杏外种皮多糖单糖组成研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、银杏外种皮多糖单糖组成研究［摘要］采用PMP柱前衍生化HPLC对水解后银杏外种皮多糖中的单糖组分进行研究。采用AgilentHC-C18色谱柱(4.6mmX250mm,5卩m)；流动相0.1mol•LT磷酸盐缓冲液(pH6.8)-乙膳(84:16)等度洗脱；柱温40°C,流速1mL•min-1,检测波长245nmo从银杏外种皮多糖水解液中分析鉴定了6种单糖，分别为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖，其摩尔比为0.032：0.14：0.296:0.403:0.106:0.046。［关键词］银杏;多糖;单糖；PMP；HPLC［收稿日期］2013-09-04［基金项目］江苏省科
2、技发展计划医药高技术研究基金项目(BG2007609)［通信作者］*许爱华，教授，Tel:13815827628,E-mail：yzxih@21cn.com［作者简介］茅蕾蕾，硕士研究生，Tel:13952781694,E-胆订：zzlml989@126.com多糖的生物活性与其化学结构密切相关，其单糖组成作为多糖分子昔键的构型、空间结构的基础对于其肿瘤免疫药理学活性尤为重要。已有的研究显示，石斛多糖的抗肿瘤活性与该多糖中含有甘露糖和葡萄糖有关［1］。从绞股蓝中分离得到的酸性多糖既有抗肿瘤作用,又可增强免疫活性[2]。有文献显示，具有抗肿瘤活性的多糖主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、
3、鼠李糖、木糖以及糖醛酸等组成[3]。银杏GinkgokdlobaL.系裸子植物银杏科银杏属种落叶乔木，是我国特有的名贵树种，其叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值，被称为“全身都是宝的活化石"。银杏外种皮提取物（Ginkgokdlobaexocarpextracts,GBEE）是从银杏的外种皮中提取的活性组合物，本课题前期实验研究结果表明，GBEE具有显著抗肿瘤作用[4-5],并可促进荷瘤小鼠及CTX损伤小鼠的免疫功能[6],多糖类物质是GBEE发挥抗肿瘤及免疫促进作用的主要有效成分[7-9],其平均相对分子质量为11062.5[10],然而对于其多糖的单糖组成尚不明确。本研究采用PMP柱前
4、衍生化[111HPLC对GBEE中多糖（以下简称银杏外种皮多糖）的单糖组成进行分析，为进一步进行相关构效关系研究奠定基础。1材料1.1主要仪器与试剂LC-20ATvp高效液相色谱仪，SPD-20Avp紫外检测器，CT0-20AC柱温箱，N2000色谱工作站（日本岛津公司），BT125D型1/10万电子天平（德国sartorius公司）。甘露糖（Man,批号20120612）、一水合鼠李糖（Rha・H20,批号20120708）.葡萄糖（Glc,批号20120723）.半乳糖（Gal,批号20120508）、阿拉伯糖（Ara,批号20120808）.1-苯基-3-甲基-5-毗哇咻酮（PMP,
5、批号20111110）均购自国药集团化学试剂有限公司，半乳糖醛酸（GalUA,编号111646-200301）购自中国食品药品检定研究院；乙睛，HPLC级（美国Tedia公司）。1.2供试品GBEE2012年10月1日从江苏泰兴3个银杏果园分别采集成熟的银杏，经扬州市药品检验所尹萌主任药师鉴定为银杏G.biloba科植物的银杏果。由本实验室采用手工方法将银杏的外种皮与白果分离，将银杏外种皮按1：8料液比加水煎煮，按发明专利方法（专利号201010251050.9）提取分离，将过滤液减压浓缩到一定的浓度后乙醇沉淀，乙醇终浓度为80%,将沉淀物真空干燥后得灰白色粉末，即GBEEo经红外光谱分析
6、鉴定，GBEE中含蛋白多糖，经苯酚硫酸法及考马斯亮蓝法测得GBEE中蛋白多糖总含量为66.4%o本实验对批号为20121108,20121111,20121115的3个不同来源的GBEE进行测定。2单糖组成分析方法2.1混合单糖对照品溶液的制备及衍生化精密称取甘露糖、鼠李糖•一水、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖6种单糖对照品适量，加水制成每ImL分别含甘露糖0.06mg、鼠李糖0.08mg、半乳糖醛酸0.36mg、葡萄糖0.25mg、半乳糖0.1mg、阿拉伯糖0.07mg的混合单糖对照品溶液。取该溶液250PL,加入0.5mol•LTPMP甲醇溶液250卩L、0.3mol•L-lNa
7、OH溶液250uL涡旋混合0.5min,于75°C反应1.5h,冷却至室温，加入0.3mol-L-1HC1溶液250nL进行中和，并加入水1500PL稀释，摇匀，再加入氯仿5mL涡旋混匀0.5min,静置5min,弃去氯仿液。重复3次后过0.45um微孔滤膜。1.2银杏外种皮多糖的水解及衍生化精密称取GBEE粉末适量置于具塞试管中，加入2mol•L-lH2S04溶液2.0mL,于100°C沸水浴中水解8h,冷却至室温。用
