应用自身抗体结合多肽阵列重建早期诊断胰腺癌

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1、应用自身抗体结合多肽阵列重建早期诊断胰腺癌赣南医学院第一附属医院341000江丙赣州【摘要】目的：分析自身抗体结合多肽阵列重建在胰腺癌早期诊断中的应用价值。方法：收集2014年1月-2015年6月我院早期胰腺癌患者40例作为观察组研究对象，并选取同期来我院健康体检中心体检的健康者40例作为对照组研究对象，均进行间接免疫荧光法检测，并结合多肽阵列重建，分析自身抗体结合多肽阵列重建的临床诊断价值。结果：观察组自身抗体阳性患者25例(62.50%),多于对照组的7例(17.50%),数据差异显著(P<0.05)。观察组40例患者中，经自身抗体结合多肽阵列重建诊断39例，诊断符合率为

2、97.50%。结论：自身抗体结合多肽阵列重建在胰腺癌早期诊断中的应用价值较高，建议在临床上进行推广。【关键词】自身抗体；多肽阵列重建；胰腺癌【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】9128-6509(2015)12-0007-02胰腺癌是一种病程隐匿、早期诊断率低、发展快、易恶化且预后极差的一种恶性肿瘤，对患者的身体健康危害极大，临床主要根据影像学、病理或细胞学进行诊断，胰腺癌早诊断中可靠的特异性血清标志物较为缺乏［1］。木文主要分析了自身抗体结合多肽阵列重建在胰腺癌早期诊断中的应用价值，现作出如下总结性报告。1资料与方法1.1临床资料收集2014年1月-2015年6月我院早期

3、胰腺癌患者40例(均经手术病理证实)作为观察组研究对象，其中男23例，女17例，最大年龄72岁，最小年龄32岁，平均(61.11±4.32)岁；并选取同期来我院健康体检中心体检的健康者40例作为对照组研究对象，其中男22例，女18例，最大年龄68岁，最小年龄30岁，平均(61.38±4.26)岁。两组研究对象年龄、性别等方面根据统计学分析，无明显差异(P>；0.05),具有比较价值。1.2方法1.2.1Pepscan方法的建立设计合成p53、k-ras、和MUC1肿瘤抗原的Pepscan筛选多肽阵列。分别对P53、k-ras、和MUC1单克隆和多克隆

4、抗体进行抗原决定簇作图(抗体识别的抗原决定簇已知)。以建立基于多肽阵列技术的Pepscan方法。1.2.2抗原多肽筛选初步建立胰腺癌特异肿瘤相关抗原的Epitope指纹图谱，合成p53、MUC1和k-ras肿瘤抗原的Pepscan多肽阵列。对40例滕腺癌患者进行免疫印迹飾选，建立胰腺癌肿瘤相关抗原的Epitope指纹图谱。1.2.3多肽阵列血清免疫印迹5%脱脂牛奶封闭后在室温环境下静置30分钟。随后将PBS稀释的待测血清加入，在室温环境下孵育lh。PBS-T洗10min×3次。1:5000稀释HRP标记兔抗人IgA+IgG+IgM(H+L)(Sigma)抗体,室温孵育l

5、h。PBS-T洗10分钟×3次。ECL显色，数码照相。1.2.4合成血清抗体检测多肽阵列根据PeptideAAV0.3.0软件分析检测结果，数据进行Geneticalgorithm/k-nearestneighbor分析，建立胰腺癌血清自身抗体的特征性线性抗原决定簇“指纹”图谱。挑选多肽，使用SPOT技术合成胰腺癌抗体检测多肽阵列。为提高实验的准确性和可重复性，每个多肽都合成多个拷贝。1.3统计学分析数据资料均采用SPSS19.5进行统计分析，计量资料、计数资料采用均数(x±s)、百分比(％)表示，JCL分别用t、X2检验，P<0.05表示存统计学意义。2

6、结果经自身抗体结合多肽阵列重建诊断确诊39例，与病理诊断结果对比,诊断符合率为97.50%。在本次研究中，观察组自身抗体阳性患者25例，对照组自身抗体阳性患者7例，两组数据对比差异显著(P<0.05),详见表1.表1两组患者自身抗体阳性率对比3讨论在世界范围内胰腺癌的发病率均有明显增长趋势，根据上海市区恶性肿瘤患病率统计，1995年胰腺癌男、女患病率已分别为9.6/10万、9.2/10万，在全身恶性肿瘤发生率中排在第7和第8位，对我国人们健康威胁极大［2］。现阶段，通过临床研究可知，建立快捷、准确的血清肿瘤自身抗体检测新方法，可省略蛋白重组表达和提纯等步骤来对肿瘤血清自身抗体

7、进行检测，和传统检测方法相比，有操作简便、实验周期短ii具有标准化等优势，所以在多种肿瘤抗原检测中得以应用及推广［3-4］;并且在高通量检测多种肿瘤相关抗体的表达中也适用，应用前景较为广阔。在研究中我们将P53、K-ras和MUC1三个胰腺癌中常见肿瘤相关抗原作为靶点，通过多肽阵列方法进行抗原决定簇作图，在进行血清抗体检测研究吋选择阳性多肽组成血清抗体检测微阵列，主要目的是为了建立筛选TAAs的抗原表位，以此来取代全长肿瘤相关抗原蛋白完成血清抗体检测［5］。根据近年来