实验室标本结核菌涂片体会

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1、实验室标本结核菌涂片体会新疆吐鲁番地区中心医院838000【摘要】结核病曾经是我国重要的传染病，目前乂有死灰复燃冃逐渐上升的趋势。作为防治结核病的基层单位，发现和控制传染源是阻断结核病的基础。而通过痰液检查结核杆菌是诊断结核病、发现排菌病人及考核化疗效果的一个有力依据。现将我们在长期工作中提高痰检阳性率的经验和体会总结如下。【关键词】涂片染色；痰标木；抗酸杆菌；结核病诊断；染色镜检结核病的诊断极大稈度取决于细菌学检验的结果。痰菌直接涂片染色镜检又构成结核病临床诊断及防治工作中不可或缺的一项重要组成部分。结核病是严重危害人类健康的慢性传染病，

2、全球己有20亿人感染结核菌，1993年WHO宣布“全球结核病处于紧急状态”，把结核病列为重点控制的传染病，我国是全球22个结核病高负担国家之一。发现和治愈病人是控制疫情的最有效措施，涂片检查是各个结核病实验室普遍使用的最基木的细菌学检查方法，其特点是简单、快捷和廉价。是发现传染源的主要途径和手段，是结核病诊断和鉴别诊断、制定化疗方案、疗效考核的可靠标准,在结核病防治工作中起着不可缺少的重要作用。加强其质量控制是做好结核病防治工作的重要保证。1标木采集要求1.1因症就诊、转诊、或因症推荐是发现结核病人的主要方式，根据症状和感染部位的不同，可釆

3、集不同标木涂片检查，最常见的是痰，还有脑脊液、胸腹水、关节液、脓性分泌物及大小便等。对初诊疑似肺结核病人应送三份痰标木（夜间痰、清晨痰、即时痰）。如无夜间痰，在清晨后2—3小时在留取一份痰标木；或在送痰时，留取两份即时痰。治疗中或复诊随访病人按期每次送痰两份（清晨痰和夜间痰）。痰标木应来自肺部深咳出的，以脓样、干酪样或者脓性粘液样性质痰为合格标木，痰量应有3-5MLo收检时应注明标木性状（脓样痰、干酪样痰、血性样痰、脓性粘液痰、水样痰）以供分析结果时参考。标本容器应采用国家结核病参比实验室统一的螺旋盖瓶或可密封有塑料盒、蜡纸密闭盒。容器上须

4、标明病人的姓名、编号及日期。痰标本质量好坏、是否停抗结核药直接影响结核菌检出阳性率。当肺部结核病灶与支气管相通吋，咳出的痰中含菌量较高。提高标本中结核菌的检出率的正确操作方法应该是：在采集标本前，患者应以沾水漱口，这样可以去掉口腔内的大部分染菌，然后鼓励病人用力咳嗽（如有出血危险的病人应避免用力咳嗽），尽力将气管深部的痰液咳出，并将咳出的痰液放于清洁（最好消毒过的）容器内并加盖，马上送检验室，直接涂片检查。采集痰液的最好吋间是清晨起床吋咳岀的痰。另一个必须注意的问题是，有的病人无痰,咳嗽也很少，而为了应付查痰就将唾沫作为痰标本进行检查，这样

5、的痰标本、结核菌的检出率很低，甚至根本检测不到结核菌，报告结果肯定是阴性的，这样的检验结果是不正确的，也绝对不可靠。1.2浓缩集菌法涂片染色能查到结核分枝杆菌者，一般需要每毫升痰液内含菌量至少500个以上，甚至需达到5万以上，所以结核患者痰标本直接涂片染色阳性率很低，经浓缩集菌后再进行染色镜检可显着提高检测的阳性率。1.2.1漂浮法：1）取24小时痰液15ml,装入细口瓶内,加入2倍量0.5%氢氧化钠摇匀，高压灭菌或煮沸20-30分钟杀菌。2）待冷后加入汽油或二甲苯2ml,用力振荡20-30分钟，用0.9%氯化钠溶液加至液面与瓶口齐，静置半

6、小时。3）取瓶口表面油状物涂于载玻片上，微微加热，干后再加，如此重复5—6次，至厚度适宜，烘干待冷，抗酸染色后镜检。122沉淀法：1）取痰液1份与2倍量4%氢氧化钠混合，高压灭菌或煮沸20—30分钟后，加入0.02%酚红指示剂0.1ml,剧烈振荡混匀，亦可置37°C水浴消化30分钟。2）校正pH为7.0,3000r/min离心30分钟，弃去上清液。3）取沉淀物涂片染色镜检。若进行分离培养和动物接种，则应免去高压灭菌或煮沸的程序。2涂片染色镜检的质量控制痰涂片时，用接种环或竹签茬端挑取痰的脓样、干酪样部分涂片；小便收集晨尿或24h尿沉淀，大便

7、取脓样部分涂片；脑脊液静置后取表面细薄凝块涂片；胸腹水、关节液离心后取沉渣涂片；脓性分泌物可直接涂片［1］。玻片应该是经95%(v/v)乙醇脱脂后的清洁无划痕的新玻片，只能一次性使用，一张玻片只能涂一份标本，在玻片的右侧2/3中央涂0.05-0.1ml标本，面积为2.5cm*2.0cm,厚薄适当并均匀，镜检时可见2—3水平层，玻片背面的左侧1/3处标明病人的姓名和编号。染色吋先经火焰固定涂片，滴加碱性复红乙醇染液盖满标本膜。加热至出现蒸汽，切勿使染液沸腾，染液始终覆盖标本膜，保持3分钟，流动水自玻片背面上端轻轻洗去染液，再用5%(v/v)盐

8、酸乙醇脱至标本膜无可视红色为止，流水自玻片背面背面上端轻轻洗去脱色液，最后滴加亚甲蓝复染30秒钟，如前法洗去脱色液，干后镜检。染好的合格涂片标本膜应呈均匀淡蓝色，无红色斑块，脱落