星点设计-效应面法优化金花茶茶多酚提取工艺研究

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1、星点设计■效应面法优化金花茶茶多酚提取工艺研究赫媛媛(河西学院医学院甘肃张掖734000)【摘要】目的:优化金花茶叶的提取工艺。方法:以乙醇浓度、提取时间和溶媒比为自变量,金花茶多酚的含量为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用效应面法筛选最佳工艺条件。结果:确定最优提取工艺为61.56%乙醇34.39倍量回流提取38.68min。结论:星点设计■效应面法优选的金花茶提取工艺方法简便,精度更高。【关键词】金花茶;茶多酚;星点设计;效应面法【中图分类号】R943【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(20

2、15)24-0310-02金花茶[Camelliachrysantha(Hu)Tuyama]是山茶科山茶属植物,茶多酚是其主要有效成分,在抗肿瘤、抗微牛物、抗衰老、预防心血管疾病、降血糖和降血脂等很多方面具有良好的牛物活性[1-2]o然而应用较多的离子沉淀法所得的产品具有潜在的危害[3],因此有必要对茶多酚的提取工艺进行研究。本实验采用溶剂提取法,在单因素考查的基础上利用星点设计,通过三维效应面进行数据处理与拟合,优化金花茶叶中多酚类化合物的提取工艺,为多酚类成分的提取提供依据。1•仪器与试药7502型紫外分光光度计(上海欣茂仪

3、器有限工司),FA2004电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司),没食子酸对照品(中国药品牛物制品坚定所,批号11083-200803),金花茶叶为市售,水为纯化水,实验所用试剂均为分析纯。2.方法与结果2.1含量测定2.1.1对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量,精密称定,置50ml容量瓶中,加2ml水和2.5ml酒石酸亚铁溶液,充分混合,再加pH7.5磷酸盐缓冲溶液至刻度,制成浓度为0.20mg/ml的对照品溶液。2.1.2供试品溶液的制备精密取金花茶叶粉末lO.OOg,加药材X3倍量的XI%的乙醇溶液水浴冋流提取,提

4、取X2分钟。趁热抽滤、浓缩,浓缩液依次用70、50ml乙酸乙酯萃取2次除去脂溶性大的杂质。蒸干萃取后的醇提液,转移至50ml容量瓶中,力CI2ml水、2.5ml酒石酸亚铁溶液充分混合,再加pH7.5缓冲溶液至刻度。精密取上述溶液2ml置25ml容量瓶中,加pH7.5缓冲溶液至刻度,得供试品溶液。2.1.3标准曲线的绘制精密取0.20mg/ml的没食子酸对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml,置25ml容量瓶中,加pH7.5缓冲溶液至刻度,分别配成0.008、0.016、0.024、0.032

5、、0.040、0.048、0.056、0.064mg/ml的溶液。以pH7.5缓冲溶液为空白,在λ540nm波长处测定各吸光度。以吸光度为纵坐标y,质量浓度x(mg/ml)为横坐标,得回归方程y=2.8542x-0.0143(R2=0.999)o线性范围为8.065〜64.384mg·L-1。2.1.4精密度试验表明仪器精密度良好。取对照品溶液0.3ml,重复测定其吸光度,RSD=0.38%,2.1.5稳定性试验按2.1.2项下方法制备样品溶液,分别在0、2、4、6、8h测定,RSD=0.45%,表明

6、样品溶液在8h内检测稳定。2丄6重现性试验取同一批次的5份样品,按2.1.2项下方法制成样品溶液,测定其吸光度,RSD二0.52%,表明本方法重现性好。2丄7加样冋收率试验精密取5份已知含量的样品粉末各1.5g,分别准确加入一定量的茶多酚对照品,依样品溶液的制备及测定条件项下操作,计算平均冋收率为95.34%,RSD=1.26%,说明该方法符合要求。2.2冋流提取工艺优化2.2.1正交试验设计选取乙醇浓度、提取吋间、料液比、提取次数为考察因素,因提取次数为非连续变量,冋归处理较困难,暂定为2次。根据星点设计的原理,每因素设为5水

7、平,用代码・α、・1、0、1、α来表示,因素水平见表1,试验安排见表2。表1试验因素水平表注:15〜20为重复试验,结果用平均值表示。2.2.2模拟方程的建立与方差分析应用Design-Expert7.0,对表2中的数据进行多元线性冋归和二项式方程拟合,得到乙醇浓度(XI)、提取时间(X2)、料液比(X3)与金花茶中茶多酚之间的二项式拟合模型如下:Y=-37.33368+0.37417Xl+0.65211X2+1.14245X3-7.61693×10-4XlX2-5.54412×1

8、0-3XlX3+7.12275×10-3X2X3-6.40617×10-4X12-0.0110989X22-0.015851X32(R2二0.9435)。根据结果分析,多元线性冋归R2=0.8926,表明89.26%的试验数据的变异性可用

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