医学毕业论文白血病细胞可变铁池的检测及其意义

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1、白血病细胞可变铁池的检测及其意义姓名：2014年6月25日白血病细胞可变铁池的检测及其意义作者：贾国存，高举，廖清奎，李丰益，袁粒星，何斌【摘要】为丫研究细胞可变铁池(labileironpool，LIP)的检测方法，用不同浓度的去铁胺(DFO)与K562及HL-60细胞共同培养0、6、12、24、48小吋，用钙荧光素(caicein)负荷K562及HL-60细胞，荧光分辨仪检测细胞荧光量；用快速铁螯合剂螯合铁，使恢复荧光，然后计算2次荧光差值。结果表明：浓度为50和100pnol/L的DFO作用于K562及HL-60细胞12小时后，荧光值明显高于对照组(

2、P0.05),且LIP的荧光差值(ALIP)随DFO作用时间的延长及浓度增加而降低，即呈一定的吋间及剂量依赖性。结论：DFO通过螯合细胞内铁降低了白血病细胞LIP;caiceinAM荧光可作为检测细胞LIP变化的比较可靠的方法。【关键词】铁DetectionoftheLabileIronPoolinLeukemiaCellsandItsSignificanceAbstractToexplorearapidandeasymethodtodetectlabileironofpool(LIP)incells，HL-60andK562cellswerecultur

3、edataconcentrationlx]06/mlinRPMI1640containing10%heat-inactivatedfetalbovineserum.Theirondeprivationwasinducedbyaddingdesferrioxamine(DFO)10-100pmol/Lfor0-48hours.TheintracellularLIPwasmeasuredbyprobecalcein-AM.Caiceinfluorescencewasmonitoredin1420multilabelcounter.Theresultsindic

4、atedthatwhenHL-60andK562cellswereincubatedwithdifferentconcentrationsofDFO，thecaiceinfluorescenceintensitywashigherthanthatofcontrolgroupat12，24and48hours(P0.05).FluorescencevalueofrepresentingLIPinDFOgroupswaslowerthanthatinthecontrolgroup.Inconclusion，DFOcandecreaseLIPinleukemia

5、cells.Theapproachusedinthisstudymayprovideasimpleandreliablemethodfordetectionofintracellularironhomeostasis.Keywordsiron;desferrioxamine;K562;HL-60铁是细胞维持正常功能活动所必需的元素，但过多的铁又可损伤细胞。细胞铁水平受铁代谢相关蛋白（转铁蛋白-转铁蛋白受体，铁蛋白）的共同调节而维持平衡，其调节机制与胞浆铁调节蛋白与铁反应元件的结合奋关。虽然细胞内铁有不同的结合形式和不同的配体，但目前认为能够反映细胞铁状态和

6、能够被铁调节蛋白感受的铁是胞浆中结合力较弱、分子量较小的那部分铁，即可变铁池（labileironpool,LIP）[1]。然而，过去一直缺少比较可靠的直接检测细胞LIP的方法。新近我们应用一种荧光探针标记的方法检测活细胞LIP，观察在铁螯合的状态下细胞L1P的变化，现报告如下。材料和方法材料细胞株人白血病细胞株K562为本实验室保存株；HL-60细胞引自四川大学棊础与法医学院细胞分子生物学实验室。主要试剂及仪器韦丐焚光素乙酰氧藻甲酯（calccinacctoxymcthylester,calccinAM）（Sigma公司产品），BIP（2，2-Bipyr

7、idine，Sigma产品）；去铁胺（desferrioxamine，DFO瑞士产品），RPMI1640培养液（Gibco产品），特级新生牛血清（Hyclone公司产品）；HEPES（BoehringerMannheim公司产招），DMSO（上海试剂公司产招），HBS：150mmol/LNaCl（上海生物工程公司产品）、20mmol/LHEPES（上海生物工程公司产品），台盼蓝（Sigma公司产品）。多功能分辨灾光仪（1420multilabelcounter.WALLAC公司产品）；倒置荧光显微镜（Olympus公司产品）。方法细胞处理将K562、HL-

8、60细胞置于含10%灭活小牛血清中，在37°C、5%CO2培养箱中