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时间:2018-12-05
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1、白血病细胞可变铁池的检测及其意义姓名:2014年6月25日白血病细胞可变铁池的检测及其意义作者:贾国存,高举,廖清奎,李丰益,袁粒星,何斌【摘要】为丫研究细胞可变铁池(labileironpool,LIP)的检测方法,用不同浓度的去铁胺(DFO)与K562及HL-60细胞共同培养0、6、12、24、48小吋,用钙荧光素(caicein)负荷K562及HL-60细胞,荧光分辨仪检测细胞荧光量;用快速铁螯合剂螯合铁,使恢复荧光,然后计算2次荧光差值。结果表明:浓度为50和100pnol/L的DFO作用于K562及HL-60细胞12小时后,荧光值明显高于对照组(
2、P0.05),且LIP的荧光差值(ALIP)随DFO作用时间的延长及浓度增加而降低,即呈一定的吋间及剂量依赖性。结论:DFO通过螯合细胞内铁降低了白血病细胞LIP;caiceinAM荧光可作为检测细胞LIP变化的比较可靠的方法。【关键词】铁DetectionoftheLabileIronPoolinLeukemiaCellsandItsSignificanceAbstractToexplorearapidandeasymethodtodetectlabileironofpool(LIP)incells,HL-60andK562cellswerecultur
3、edataconcentrationlx]06/mlinRPMI1640containing10%heat-inactivatedfetalbovineserum.Theirondeprivationwasinducedbyaddingdesferrioxamine(DFO)10-100pmol/Lfor0-48hours.TheintracellularLIPwasmeasuredbyprobecalcein-AM.Caiceinfluorescencewasmonitoredin1420multilabelcounter.Theresultsindic
4、atedthatwhenHL-60andK562cellswereincubatedwithdifferentconcentrationsofDFO,thecaiceinfluorescenceintensitywashigherthanthatofcontrolgroupat12,24and48hours(P0.05).FluorescencevalueofrepresentingLIPinDFOgroupswaslowerthanthatinthecontrolgroup.Inconclusion,DFOcandecreaseLIPinleukemia
5、cells.Theapproachusedinthisstudymayprovideasimpleandreliablemethodfordetectionofintracellularironhomeostasis.Keywordsiron;desferrioxamine;K562;HL-60铁是细胞维持正常功能活动所必需的元素,但过多的铁又可损伤细胞。细胞铁水平受铁代谢相关蛋白(转铁蛋白-转铁蛋白受体,铁蛋白)的共同调节而维持平衡,其调节机制与胞浆铁调节蛋白与铁反应元件的结合奋关。虽然细胞内铁有不同的结合形式和不同的配体,但目前认为能够反映细胞铁状态和
6、能够被铁调节蛋白感受的铁是胞浆中结合力较弱、分子量较小的那部分铁,即可变铁池(labileironpool,LIP)[1]。然而,过去一直缺少比较可靠的直接检测细胞LIP的方法。新近我们应用一种荧光探针标记的方法检测活细胞LIP,观察在铁螯合的状态下细胞L1P的变化,现报告如下。材料和方法材料细胞株人白血病细胞株K562为本实验室保存株;HL-60细胞引自四川大学棊础与法医学院细胞分子生物学实验室。主要试剂及仪器韦丐焚光素乙酰氧藻甲酯(calccinacctoxymcthylester,calccinAM)(Sigma公司产品),BIP(2,2-Bipyr
7、idine,Sigma产品);去铁胺(desferrioxamine,DFO瑞士产品),RPMI1640培养液(Gibco产品),特级新生牛血清(Hyclone公司产品);HEPES(BoehringerMannheim公司产招),DMSO(上海试剂公司产招),HBS:150mmol/LNaCl(上海生物工程公司产品)、20mmol/LHEPES(上海生物工程公司产品),台盼蓝(Sigma公司产品)。多功能分辨灾光仪(1420multilabelcounter.WALLAC公司产品);倒置荧光显微镜(Olympus公司产品)。方法细胞处理将K562、HL-
8、60细胞置于含10%灭活小牛血清中,在37°C、5%CO2培养箱中
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