医学毕业论文tag1抗原hla

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1、TAG1抗原HLA姓名：2014年6月25日TAG1抗原HLA作者：栾琪，高天文，李春英，王刚，沈柱，党育平，李强【关键词】，，睾丸肿瘤PredictionofHLAA2restrictedcytotoxicTlymphocyteepitopesofTAG1andexpressionandpurificationoffusionproteinsoftheseepitopesandHsp70【Abstract】AIM:TopredictHLAA2restrictedcytotoxicTlymphocyte（CTL）epitopesofthenovelcancer/testi

2、santigenTAG1andtoexpressandpurifythefusionproteinsoftheseepitopesandHsp70inprokaryoticsystem.METHODS:LongdistancepredictionsystemSYFPEITHIandpolynomialmethodwereusedtopredicttheHLAA2restrictedCTLepitopesofTAG1.Theepitopeswerethenclonedintotheexpressionvectoraftersynthesizingandannealingth

3、enucleotidesequencesoftheseepitopes.AfterinducedwithIPTQtheexpressedfusionproteinswerepurifiedwithGSTrapFFcolumn.RESULTS:ThreeHLAA2restrictedCTLepitopesofTAG1wereselected.ThefusiongenesPGEXbwHsp70wereconstructedandthefusionproteinswereacquiredsuccessfully.CONCLUSION:ThefusionproteinsofHsp

4、70andthreeHLAA2restrictedCTLepitopesareexpressedandpurifiedsuccessfully，whichwillbehelpfulinstudyingtheirimmunefunctionsanddevelopnewpeptidevaccinesofmalignantmelanoma.[Keywords]testicularneoplasms;antigens，neoplasms;HeatShockproteins70;TAG1;Epitopes;polynomialmethod【摘要】目的：对在恶性黑素瘤（MM）组织屮表

5、达率极高并具有强免疫原性的新型睾丸肿瘤（C/T）抗原TAG1表位的HLAA2限制性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位进行预测，并表达、纯化所预测表位与热休克蛋白70（Hsp70）融合蛋白，为特异性主动免疫治疗MM打下物质基础.方法：利用SYFPEITHI法和多项式方案结合预测TAG1的HLAA2限制性CTL表位，并将预测所得表位基因片断双串连后进行生物合成，克隆入带有GST标签并含Hsp70基因的原核表达载体，在IPTG诱导表达后，用GST蛋白纯化系统纯化.结果：预测并得到了三个TAG1的HLAA2限制性表位，成功地构建了表位与Hsp70的原核表达质粒(PGEXbwHSP7

6、0)；表达和纯化得到了三个表位与Hsp70的可溶性融合蛋白.结论：成功获得三个预测表位与Hsp70的融合蛋白，为进一步研究其免疫功能、研制TAG1对MM的特异性治疗肽疫苗奠定了基础.【关键词】睾丸肿瘤；抗原，肿瘤；TAG1；热休克蛋白70;表位•，多项式方案0引言恶性黑素瘤(MM)发病率正呈逐年上升趋势，己有许多MM相关抗原及其限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)相关表位被发现，但部分肿瘤抗原及其表位表达量较低、免疫原性较差，不能刺激足够强的抗肿瘤特异性免疫效应.新型C/T抗原TAG1是新近发现的抗原，在MM组织中表达率极高，并具有较强的免疫原性，是较为理想的MM治疗候选抗

7、原，但是其表位研究目前刚刚起步[1].热休克蛋白70(Hsp70)作为分子伴侣，可增强与其结合蛋白的抗原性，产生特异性的杀伤效应，因而Hsp70肿瘤肽复合物是有效的抗肿瘤疫苗[2].因中国人群的HLAA2型占53%,本研究利用CTL表位预测结合重建技术，对新C/T抗原HLAA2限制性CTL表位进行预测，将其基因与Hsp70融合、表达、纯化，为MM肽疫苗的研制奠定基础.1材料和方法1.1材料原核表达载体pGEX4Tl与GST亲和层析柱为Clontech公司产品；BamHI，Hind111和EcoRI等内切酶均为TaKaRa公司产