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1、TAG1抗原HLA姓名:2014年6月25日TAG1抗原HLA作者:栾琪,高天文,李春英,王刚,沈柱,党育平,李强【关键词】,,睾丸肿瘤PredictionofHLAA2restrictedcytotoxicTlymphocyteepitopesofTAG1andexpressionandpurificationoffusionproteinsoftheseepitopesandHsp70【Abstract】AIM:TopredictHLAA2restrictedcytotoxicTlymphocyte(CTL)epitopesofthenovelcancer/testi
2、santigenTAG1andtoexpressandpurifythefusionproteinsoftheseepitopesandHsp70inprokaryoticsystem.METHODS:LongdistancepredictionsystemSYFPEITHIandpolynomialmethodwereusedtopredicttheHLAA2restrictedCTLepitopesofTAG1.Theepitopeswerethenclonedintotheexpressionvectoraftersynthesizingandannealingth
3、enucleotidesequencesoftheseepitopes.AfterinducedwithIPTQtheexpressedfusionproteinswerepurifiedwithGSTrapFFcolumn.RESULTS:ThreeHLAA2restrictedCTLepitopesofTAG1wereselected.ThefusiongenesPGEXbwHsp70wereconstructedandthefusionproteinswereacquiredsuccessfully.CONCLUSION:ThefusionproteinsofHsp
4、70andthreeHLAA2restrictedCTLepitopesareexpressedandpurifiedsuccessfully,whichwillbehelpfulinstudyingtheirimmunefunctionsanddevelopnewpeptidevaccinesofmalignantmelanoma.[Keywords]testicularneoplasms;antigens,neoplasms;HeatShockproteins70;TAG1;Epitopes;polynomialmethod【摘要】目的:对在恶性黑素瘤(MM)组织屮表
5、达率极高并具有强免疫原性的新型睾丸肿瘤(C/T)抗原TAG1表位的HLAA2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位进行预测,并表达、纯化所预测表位与热休克蛋白70(Hsp70)融合蛋白,为特异性主动免疫治疗MM打下物质基础.方法:利用SYFPEITHI法和多项式方案结合预测TAG1的HLAA2限制性CTL表位,并将预测所得表位基因片断双串连后进行生物合成,克隆入带有GST标签并含Hsp70基因的原核表达载体,在IPTG诱导表达后,用GST蛋白纯化系统纯化.结果:预测并得到了三个TAG1的HLAA2限制性表位,成功地构建了表位与Hsp70的原核表达质粒(PGEXbwHSP7
6、0);表达和纯化得到了三个表位与Hsp70的可溶性融合蛋白.结论:成功获得三个预测表位与Hsp70的融合蛋白,为进一步研究其免疫功能、研制TAG1对MM的特异性治疗肽疫苗奠定了基础.【关键词】睾丸肿瘤;抗原,肿瘤;TAG1;热休克蛋白70;表位•,多项式方案0引言恶性黑素瘤(MM)发病率正呈逐年上升趋势,己有许多MM相关抗原及其限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)相关表位被发现,但部分肿瘤抗原及其表位表达量较低、免疫原性较差,不能刺激足够强的抗肿瘤特异性免疫效应.新型C/T抗原TAG1是新近发现的抗原,在MM组织中表达率极高,并具有较强的免疫原性,是较为理想的MM治疗候选抗
7、原,但是其表位研究目前刚刚起步[1].热休克蛋白70(Hsp70)作为分子伴侣,可增强与其结合蛋白的抗原性,产生特异性的杀伤效应,因而Hsp70肿瘤肽复合物是有效的抗肿瘤疫苗[2].因中国人群的HLAA2型占53%,本研究利用CTL表位预测结合重建技术,对新C/T抗原HLAA2限制性CTL表位进行预测,将其基因与Hsp70融合、表达、纯化,为MM肽疫苗的研制奠定基础.1材料和方法1.1材料原核表达载体pGEX4Tl与GST亲和层析柱为Clontech公司产品;BamHI,Hind111和EcoRI等内切酶均为TaKaRa公司产
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