山西汉族可溶性hlaⅰ类抗原检测

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1、山西汉族可溶性HLAⅠ类抗原检测作者：张雄鹰武延隽程红兵秦雄伟【摘要】目的：定量检测正常人血清中可溶性人白细胞抗原Ⅰ(sHLAⅠ)，以探讨山西汉族人群的正常参考值。方法：ELISA法检测血清sHLAⅠ类抗原水平。将不同浓度的标准品和待检血清分别加入包被有特异性sHLAⅠ抗体的酶标板，与生物素化的sHLAⅠ、辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素共同孵育，弃上清并用洗涤液洗涤，加底物应用液四甲基联苯胺(TMB)显色，以酶标仪450nm测定吸光度值，根据不同浓度标准品显色后测得的吸光度值绘制标准曲线，测定60例健康山西人的sHLAⅠ含量。结果：ELISA法能够准确检测sHL

2、AⅠ含量，60例健康山西人的sHLAⅠ含量为(382.62±106.68)ng·ml-1。结论：山西汉族人群sHLAⅠ正常值为(382.62±106.68)ng·ml-1。【关键词】可溶性人白细胞抗原Ⅰ;酶联免疫吸附试验;定量检测1970年VanRood等首先从正常人血清中检测到可溶性人白细胞抗原Ⅰ(sHLAⅠ)[1]。现已从人类的血液、淋巴液、尿液、乳汁等体液中检测出sHLAⅠ类抗原。目前认为sHLAⅠ8类抗原与器官/组织移植、病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病等的临床表现及预后有关[2-3]。健康个体中其浓度与种族及遗传背景有关[4]。追踪文献，目前尚未见有关山西汉族s

3、HLAⅠ的定量检测及正常值的报道。我们通过定量测定健康人血清中sHLAⅠ的表达，探讨山西人群的正常参考值。　　1材料与方法　　1.1标本来源　　60例无亲缘关系的山西籍健康人(女36，男24)，为长治医学院附属和济医院健康体检者及健康志愿者，年龄20～57岁。收集上述对象外周静脉血3～5ml，经离心后(3000r·min-1，5～10min)取血清样本。　　1.2主要试剂和仪器　　可溶性HLAⅠ检测试剂盒(ADL产品)，ANTH.S2010酶标仪。　　1.3方法　　在已包被特异性sHLAⅠ抗体的酶标板中依次分别加入100μL浓度为0、0.5、1.0、2.5、5.0、10ng·m

4、L-1的标准品(每个浓度加三个复孔);每孔中再加生物素化的sHLAⅠ及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素50μl;37℃8孵育60min，弃上清并用洗涤液洗涤5次;每孔中加入底物应用液四甲基联苯胺(TMB)100μl，37℃避光孵育15min，加入50μl终止液终止反应。在30min内以酶标仪450nm测定吸光度(A)值。被测血清做1：200稀释后，按上述方法测定sHLAⅠ含量。　　2结果　　2.1标准曲线sHLAⅠ标准品含量为0、0.5、1.0、2.5、5.0、10ng·ml-1时，OD值分别为1.383、0.839、0.650、0.465、0.343、0.117，标准品

5、OD值记为B，标准品0点OD值记为B0，以B/B0为纵坐标，标准品的浓度为横坐标，在对数坐标纸上绘制标准曲线，如图1所示。sHLAⅠ含量的对数与B/B0呈线性相关，经过SPSS13.0统计软件分析，其相关指数R2=0.991，回归方程为Y=-0.1662Ln(X)+0.4864，X=e(Y-0.4864)/(-0.1662)。　　2.2对照样本以血红蛋白液、BSA代替被检血清，3个复孔，OD值为1.343～1.401，分析结果为阴性。　　2.3敏感度本试剂盒敏感度为0.01ng·ml-1。　　2.4精确度随机抽取17号样本，分别重复6次，测得批内变异系数为4.87%;同一样品连续测定

6、5d，测得批间变异系数为6.58%。8　　2.560例山西人样本OD值/标准品0点OD值，经回归方程计算出各自的sHLAⅠ含量，用统计学软件SPSS13.0进行统计学处理，结果表明山西人sHLAⅠ的浓度最低为206.59ng·ml-1，最高为592.26ng·ml-1，平均值范围(382.62±106.68)ng·ml-1。　　图1sHLAⅠ类抗原ELISA测定标准曲线3讨论　　1970年VanRood等用淋巴细胞毒抑制试验在正常人血清中检测到了HLAA2，从而证实了可溶性HLAⅠ抗原的存在[1]。目前检测sHLAⅠ类抗原常用的方法有：微量细胞毒抑制试验、流式细胞术抑制法、

7、单向等电聚焦电泳以及ELISA法等。微量细胞毒抑制试验的优点是需试剂少、操作简便，但只能定性不能定量，抗血清的质量直接影响试验结果。流式细胞术抑制法则需要特殊设备，且试剂用量大，价格昂贵。单向等电聚焦电泳可检测sHLAⅠ类抗原的同种异型，但操作繁琐，且不能定量。而目前广泛使用的酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法具有很好的敏感性和可重复性。Kao于1986年使用ELISA竞争法测出健康人血清sHLAⅠ类抗原含量为(1470±870)n