hpv18 e7抗原hla

《hpv18 e7抗原hla》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、HPV18E7抗原HLA【摘要】目的:初步鉴定人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-DRB1*0301限制性辅助T淋巴细胞（T-HelperCell）表位。方法:用SYFPEITHI软件预测HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位，候选表位分别命名为P1、P2、P3，以固相多肽合成技术合成，并运用HPLC进行纯化和质谱法(MS)鉴定。以密度梯度法分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)，合成肽刺激PBMC，用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测淋巴细胞增殖活性，

2、流式细胞仪分析细胞表型。结果:多肽P1（HPV18E780-94）在体外刺激PBMC后能够有效诱导CD4+T淋巴细胞增殖。结论:P1（HPV18E780-94）可能为HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th细胞表位。【关键词】人乳头瘤病毒E7抗原淋巴细胞Th表位Abstract:Objective:ToidentifyHLA-DRB1*0301restrictedThepitopederivedfromhumanpapillomavirus18E7antigen.Methods:Thepr

3、imarystructureofhumanpapillomavirus18E7antigensSYFPEITHIandthreeepitopecandidates(P1,P2andP3)assspectrometry.Peptide-specificThcellstheperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)ofHLA-DRB1*0301positivehealthydonorsbystimulatingcandidateepitopes.Proliferativeac

4、tivityanpapillomavirus18E7antigen.Keyanpapillomavirus;E7antigen;lymphocyte;Thelperlymphocyteepitopes作为妇女最常见的的恶性肿瘤之一，宫颈癌的死亡率位于全球妇女癌症死亡的第二位[1]，而人乳头瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）感染是宫颈癌发生的首要因素和中心环节[2]。HPV早期基因E7的表达在细胞癌变进程和维持癌细胞恶性表型方面起着重要作用，是维持肿瘤细胞处于转化状态所必需的[3]。

5、E7抗原是HPV相关肿瘤特异性抗原，具有良好的免疫原性，成为研究最多的靶抗原。Th细胞免疫应答在特异性免疫应答中，可以辅助B细胞产生抗体以及辅助CTL活化而发挥免疫效应，并且激活的Th也能直接发挥免疫效应，因此Th表位的鉴定以及以此为基础的表位疫苗的研究也日益受到重视。本研究以HPV18E7抗原作为靶标,预测并合成Th表位，以淋巴细胞增殖试验进行筛选和鉴定，初步获得HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位。1材料和方法1.1靶抗原由Genbank获得的HPV18E7抗原由105个氨基酸

6、组成，其序列见文献[4]。1.2Th表位预测SYFPEITHI是能在互联网上免费使用的MHC-Ⅱ类表位预测的方法。将HPV18E7抗原氨基酸序列输入(.uni-tuebingen.de/uni/kxi)SYFPEITHI网站，选择EPITOPE-PRE-DICTION进入Th表位预测界面，选择氨基酸长度为15-mers，基因型为HLA-DRB1*0301(DR17)、HLA-DRB1*0101、HLA-DRB1*0401(DR4Doc方案在ABI431A型多肽合成仪上进行多肽的合成，在Delta600型

7、HPLC上进行纯化和纯度分析，纯化后多肽的分子量测定在API2000型质谱仪上进行。当分子量测定值与理论值相符合时，所得多肽即为靶肽[5]。1.4人外周血淋巴细胞的分离在实验室采集HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血，按人淋巴细胞分离液（Cedarlane，Canada）操作步骤分离外周血单核细胞（PBMC），细胞计数板计数。1.5淋巴细胞培养及增殖实验以含10%自体血清（抽取同一人新鲜血室温斜置0.5～1h，再离心3000r/min×20min，56℃，30min灭活，-20℃分装保存）的IMD

8、M培养液（Gibco）调整细胞浓度至2×106/ml，于96孔平底培养板（Costar）中加上述淋巴细胞悬液及合成多肽，使终体积为200μl/孔，2×105个细胞/孔，多肽终浓度为10μg/ml。阳性对照孔加植物血凝素(PHA)（4μg/ml），阴性对照孔不加多肽，空白对照孔只加培养液。每组均设4个复孔，于37℃、5%CO2培养箱中培养6d，培养结束前24h加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)20μl(Roche，Germany)。用酶标仪