一种钩藤属植物的rdnaits序列分析

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1、一种钩藤属植物的rDNAITS序列分析［摘要］目的以核糖体转录间隔区(rDNAITS)序列作为分子条形码，对一种常用中药材钩藤进行分子鉴定和遗传分析，并阐明其在钩藤属内种间的分子系统发育关系。方法通过改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法对2015年7月采集的钩藤进行总DNA提取，利用通用引物对rDNAITS序列进行PCR扩增，经克隆、测序后，运用MEGA软件进行系统发育分析和构建系统发育树。结果测序得到该钩藤的rDNAITS区序列长度为718bp，序列分析结果显示其与GenBank数据库中己有的钩藤(Uncariarhyncho

2、phylla)rDNAITS区序列之间相似度达99.8%,并且在系统发育树中并排聚类成一支。结论基于ITS区序列测定分析的分子生物学方法和构建系统发育树的分子遗传学方法，可以对钩藤属药用植物进行分子鉴定和遗传分析，为钩藤属药用植物的种间分类地位以及种类鉴定提供准确的分子证据。［关键词］钩藤；ITS序列；分子鉴定；系统发育树［中图分类号］S567.239［文献标识码］A［文章编号]1674-4721(2016)03(a)-0004-04[Abstract]ObjectiveToclarifythephylogeneticrelati

3、onshipofonespeciesofUncaria，molecularidentificationandgeneticanalysiswerecarriedoutbyusingtherDNAITSsequenceasmolecularbarcoding.MethodsMolecularidentificationandgeneticanalysiswerecarriedoutwiththerDNAITSsequenceasmolecularmarker.TotalDNAwasextractedwithmodifiedCTABm

4、ethodandtherebyrDNAITSregionswereamplifiedwithuniversalprimer，sequencedandphylogeneticanalysedwithMEGA6.0atJuly2015.ResultsTheentirerDNAITSsequenceofUncariawas718bp.SequenceanalysisshowedthattherDNAITSsequencewascloselyrelatedtoUncariarhynchophyllaavailableinGenBankan

5、dthesimilarityreached99.8%.ConclusionBasedonmolecularbiologymethodsofrDNAITSregionanalysis，molecularidentificationisavailableinaccurateclassificationontraditionalChinesemedicinalmaterialplantsinGenusUncariaandprovidemolecularevidencefortaxonomyandidentificationofdiffe

6、rentspeciesinGenusUncaria.[Keywords]Uncaria；ITSsequence；Molecularidentification；Phylogenetictree钩藤是茜草科钩藤属植物，主要分布于我国广东、广西、四川、云南、贵州等地区。《中国药典》2015年版规定的钩藤为茜草科植物钩藤［Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.exHavil.］、大叶钩藤［UncariamacrophyllaWall.］、毛钩藤［UncariahirsutaHavil.］、华钩藤［Uncariasi

7、nensis(Oliv.)Havil.］或无柄果钩藤［UncariasessilifructusRoxb.］的干燥带钩茎枝［1］。钩藤为常用中药，药用历史悠久，具有息风定惊、清热平肝的功效。但是钩藤药材在市场上的分类鉴定比较混乱，影响了中药材用药的准确性和安全性。因此，有必要运用DNA分子标记技术进一步对钩藤属植物不同种间进行鉴定。核糖体转录间隔区(rDNAITS)序列作为分子条形码的鉴定能力己经在药用植物很多个科属基原植物及药材的鉴定中得到验证［2-12］。本研宄对采自广州中医药大学药王山的一种钩藤属药用植物进行分子鉴定和遗传分

8、析。现报道如下。1材料与方法1.1材料来源与鉴定实验用的钩藤样品于2015年7月采集于广州中医药大学药王山。常绿木质藤本；小枝四棱柱形，褐色，季净无毛；叶腋有成对或单生的钩，向下弯曲，先端尖；叶对生，具短柄，叶片卵形，卵状长圆形或椭形。本钩藤样品经