广玉兰rdnaits区序列分析

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1、广玉兰rDNAITS区序列分析潘云飞(盐城师范学院生命科学与技术学院07(19)班，江苏盐城，224002)指导老师：刘忠权【摘要】目的分析广玉兰核糖体DNA(rDNA)ITS序列及其特点和规律，为我国盐海滩涂种植业的开发及生态建设提供理论指导。方法在TagDNA聚合酶作用下，以P1和P2为引物、广玉兰核糖体DNA为模板、四种dNTP为底物，PGR扩增技木来扩增广玉兰核糖体DNAITS序列并用相关软件作序列分析。结果測得广玉兰rDNAITS及5.8SrDNA完全序列，18S和28SrDNA部分序列长度为648bp，其中ITS1为227bp,(g+c)的含量为57.3%;TS

2、2为223bp，(g+c)的含量为61.0%。与其他藜科植物比对，广玉兰rDNAITS序列上有135个变异位点。结论核糖体DNAITS序列可作为研究较低等级如属间、种间甚至居群间的系统关系的依据。【关键词】广玉兰核糖体基因组ITS序列引言广玉兰(学名：magnoliagrandifloralinn)。由于开花很大，形似荷花，固又称“荷花玉兰”。广玉兰原产于美洲，所以又有人称它为“洋玉兰”。可入药，也可做道路绿化。荷花玉兰树姿雄伟壮丽，叶大绿荫浓花似荷花芳香馥郁，为美化树种，耐烟抗风对二氧化硫等有毒气体有较强抗性，浄化空气保护环境广玉兰(gudngytilan)常绿大乔木，高

3、20-30m。树皮淡褐色或灰色，呈薄鳞片状开裂。枝与芽有铁锈色细毛。叶长椭圆形，互生；叶柄长1.5-4cm,背而有褐色短柔毛；托叶与叶柄分离，无托叶；叶革质，叶片椭圆形或倒卵状长閫形，长10-20cm，宽4-10cm,先端钝或渐尖，基部楔形，上面深绿色，有光泽，下而淡绿色，有锈色细毛，侧脉8-9对。花芳香，白色，呈杯状，直径15-20cm,开时形如荷花；花梗精壮具茸毛；花被9-12，倒卵形，厚肉质；雄蕊多数，长约2cm，花丝扁平，紫色，花药向Pb药隔伸出成短尖头；雌蕊群椭圆形，密被长绒毛，心皮卵形，长1-1.5cm,花柱呈卷曲状。聚合果圆柱状长圆形或卵形，密被褐色或灰黄色绒

4、毛，果先端具长喙。种子椭關形或卵形，侧扁，长约1.4cm，宽约6mm。花期5_6月，果期10月。广玉兰生长喜光，幼时稍耐阴，是弱阴性树种。喜温暖湿润气候，有一定的抗寒能力。适生于高燥、肥沃、湿润与排水良好的微酸性或屮性土壤，在碱性土种植时易发生黄化，忌积水和排水不良。对烟尘及二氧化硫气体有较强的抗性，病虫害少。根系深广，抗风力强，生长速度中等。特别是播种苗树干挺拔，树势雄伟，适应性强。本品中酚性成分还具有抗菌和抗真菌作用。树皮屮所含厚朴酚(magnolol)尚具有抗溃疡病作用，5_200mg/kg对大鼠水浸应激溃疡有显着的预防作用。核糖体上的基因为多拷W、中度重复序列，一个

5、重复单位由5.8S、18S、28S编码区以及一些间隔区组成(ITS)。ITS{internaltranscribedspacer)区位于18S和28S基因之间，中部被5.8S一分为二,即ITS1区与ITS2区。5.8S、18S、28S进化速率慢，常用于探讨科级和科级以上等级的系统发育问题。而间隔区如ITS区进化速率较编码区快，一般用于研究较低等级如属间、种间甚至居群间的系统关系。1材料与方法1.1植物材料采取新鲜的广玉兰，于-80°C冷冻半天，从而有利于DNA的提取。1.2主要仪器与试剂HH-S型二列四孔数显水浴锅、移液器、Eppendorf离心管、EppendorfCen

6、trifuge高速冷冻离心机、WH-962ROUERDRUM、恒温干燥器、GeneAmpPCRsystem9700、WB微波炉、水平板电泳槽、电泳仪、紫外分析仪。7收DNA聚合酶、脱氧核糖核苷酸（dNTPs）、MgCh、Buffet•缓冲液、引物（P1，P2）、琼脂糖、氯仿、试剂盒、分离缓冲液、SDS溶液、C液等。1.3广玉兰rDKA提取与纯化将-8CTC处理的广玉兰叶茎研磨成浆，将研磨的浆置于EppendorfW中，并分别加入分离缓冲液和20%的SDS溶液；置于56"C水浴1-2小吋；加入等体积的氯仿溶液，轻轻颠倒混匀15min,室温下8000rPmin高速冷冻离心10m

7、i;将离心后的上清液移至另一干净的离心管中，在加入等体积的氯仿，颠倒混匀15min,8000rPmin高速离心lOmin;弃上清液，加入70%的乙醇洗涤沉淀8000rpmin离心5min；弃上清液，放干燥处烘干（一天吋间）；取样本lOOul,加入400ulC液，混匀；将液体吸入内套管中，离心2min,弃去外套管中液体，内套管中加入500ul洗液，离心lmin,再重复此过程■-次；取出内套，弃去外套管中液体，仍然套冋内套管，不加洗液，离心lmin;将内套管取出放到新的Eppendor僧中，在膜中央加入洗胞液20-50