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《痛必定注射液对坐骨神经结扎性慢性损伤模型大鼠脊髓nr1 mrna表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、痛必定注射液对坐骨神经结扎性慢性损伤模型大鼠脊髓NR1mRNA表达的影响论文.freelRNA表达量明显升高(P0.001)；CCI＋痛必定组NR1mRNA表达受到明显抑制(P0.001)。结论痛必定注射液在脊髓水平的镇痛机理与其抑制NR1mRNA的表达有关。【关键词】痛必定注射液；N-甲基-D-天冬氨酸受体1；RT-PCR；动物模型Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofTongbidinginjectiononexpressionofN-methyl-D-aspartate(NMDA)receptor1mRNA
2、inthespinalcordofchronicconstrictioninjury(CCI)rats.MethodsThirtymaleSpragru-Dalydividedintocontrolgroup(groupA),CCIgroup(groupB)andTongbidinggroup(groupC),tenratforeahgroup.ThechangesinNR1mRNAexpressioninthespinalcorderasechainreaction(RT-PCR)techniques.ResultsTheexpressiono
3、fNR1mRNAinthespinalcordinimalincontrolgroup,CCIinducedsignificantincreaseintheexpressionofNR1mRNAinthespinalcordandTongbidingsignificantlyinhibitedtheincreaseinNR1mRNAexpression.ThereRNAexpressionintheCCIratsspinalcordmaycontributetoanalgesicmechanismsofTongbidinginthespinald
4、orsalhorn.KeyRNA；RT-PCR；animalmodel痛必定注射液由4种中药(有效成分或部位)组成,其动物实验和临床应用均显示和杜冷丁1-2有相似的镇痛效果,但无明显成瘾性,其镇痛作用产生的机理尚未完全清楚。谷氨酸/天冬氨酸受体是中枢神经系统中最重要的兴奋性神经递质/受体系统,它参与了机体多种生理和病理过程,如学习记忆、神经元可塑性变化等。研究认为,天冬氨酸受体在神经源性疼痛的产生和维持中起关键作用3。本实验采用RT-PCR技术观察痛必定注射液对于坐骨神经结扎性慢性损伤模型(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NR1mR
5、NA)表达变化的影响,探讨其镇痛机理。1材料与方法1.1动物及分组雄性arker(华美公司产品)；Takara试剂盒(大连宝生物公司)；Primer由奥科生物工程公司合成。1.3取材1%异戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,快速取出腰段脊髓,放入液氮内保存；取材结束后,将标本放入-80℃冰箱待用。1.4引物设计NRl-F：5’-GTCGGTATCAGGAATGCG-3’,NRl-R：5’-GGTGCTCGTGTCTTGGA-3’,扩增片段长度330bp；β-action-F：5’-GATTGCCTCAGGACATITCTG-3’,β-act
6、ion-R：5’-GATTGCTCAGGACATTCTG-3’,扩增片段长度620bp。1.5实验步骤提取RNA：组织0.1g,剪碎研磨＋RNA裂解液1mL,加200μL氯仿混匀,13000r/min、4℃离心15min,吸上清＋500μL异丙醇,4℃放置30～60min,13000r/min、4℃离心15min,弃上清,沉淀＋1mL70%酒精漂洗1次,13000r/min离心15min,弃上清,沉淀加dd.H2O50μL。逆转录合成cDNA：取2μLRNA65℃变性3min,加入反应缓冲液,总体积为20μL,42℃反应60min,95℃5min
7、,终止反应,加水稀释至l00μL。PCR扩增产物分析：取10μLPCR产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,溴化乙啶染色后,紫外灯下观察RT-PCR扩增产物。1.6统计学方法采用SPSS9.0软件进行统计学处理；组内比较用t检验；组间比较用单因素方差分析,并以q检验比较两两差异。2结果经RT-PCR扩增后获得受体NR1、β-action带,凝胶图像分析仪分析电泳结果,计算NR1与β-action比值。B组NR1mRNA表达明显高于其它各组(P0.01,t＝11.853),C组NR1mRNA的表达受到了明显抑制(P0.01,t＝7.641),见图l。3讨论N
8、MDA受体是哺乳动物中枢神经系统主要的兴奋性氨基酸受体之一,在中枢神经许多重要的生理和病理过程中起关键作用4。NMDA受体是由3个NMD
