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1、痛必定注射液对坐骨神经结扎性慢性损伤模型大鼠脊髓NR1mRNA表达的影响【摘要】目的观察痛必定注射液对坐骨神经结扎性慢性损伤模型(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NR1)的影响。方法雄性SD大鼠30只,随机分为正常组、CCI组和痛必定组。采用RT-PCR技术测定各组大鼠脊髓内NR1表达的变化。结果CCI组较正常组脊髓内NR1mRNA表达量明显升高(P<0.001)；CCI＋痛必定组NR1mRNA表达受到明显抑制(P<0.001)。结论痛必定注射液在脊髓水平的镇痛机理与其抑制NR1mRNA的表达有关。【关键词】痛必定注射
2、液；N-甲基-D-天冬氨酸受体1；RT-PCR；动物模型Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofTongbidinginjectiononexpressionofN-methyl-D-aspartate(NMDA)receptor1mRNAinthespinalcordofchronicconstrictioninjury(CCI)rats.MethodsThirtymaleSpragru-Dawleyratswererandomlydividedintocontrolgroup(groupA),CCIgroup
3、(groupB)andTongbidinggroup(groupC),tenratforeahgroup.ThechangesinNR1mRNAexpressioninthespinalcordwasdetectedbyreversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)techniques.ResultsTheexpressionofNR1mRNAinthespinalcordwasminimal7incontrolgroup,CCIinducedsignificantincreaseint
4、heexpressionofNR1mRNAinthespinalcordandTongbidingsignificantlyinhibitedtheincreaseinNR1mRNAexpression.TherewassignificantdifferencebetweenCCIandTongbidinggroup(P<0.001).ConclusionsInhibitionNR1mRNAexpressionintheCCIratsspinalcordmaycontributetoanalgesicmechanismsofTongbid
5、inginthespinaldorsalhorn.Keywords：Tongbidinginjection；NR1mRNA；RT-PCR；animalmodel痛必定注射液由4种中药(有效成分或部位)组成,其动物实验和临床应用均显示和杜冷丁[1-2]有相似的镇痛效果,但无明显成瘾性,其镇痛作用产生的机理尚未完全清楚。谷氨酸/天冬氨酸受体是中枢神经系统中最重要的兴奋性神经递质/受体系统,它参与了机体多种生理和病理过程,如学习记忆、神经元可塑性变化等。研究认为,天冬氨酸受体在神经源性疼痛的产生和维持中起关键作用[3]。本实验采用RT-PCR技术观察
6、痛必定注射液对于坐骨神经结扎性慢性损伤模型(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NR1mRNA)表达变化的影响,探讨其镇痛机理。 1材料与方法7 1.1动物及分组 雄性Wistar大鼠30只,体重(200±20)g[吉林大学实验动物中心提供,合格证号SCXK-(吉)2003-0001]。随机分为正常组(A组)、CCI造模组(B组)、痛必定组(C组)3组。将B组和C组大鼠在无菌条件下1%异戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉。暴露左侧的坐骨神经干,在中部4～5mm范围内,用4-0号铬制羊肠线打3～4个结,以引起小腿微微抽动为宜,然
7、后逐层缝合；另一侧行假手术。14d后用特制大鼠固定笼固定大鼠,以SH-XYT型小型动物压痛仪(深圳凯强利股份有限公司)分别测量双侧后肢的痛阈值,左侧痛阈显著降低,并结合行为学改变,认为造模成功。C组按20mg/kg体重剂量连续5d腹腔注射痛必定注射液,A、B组同时给予同剂量生理盐水。 1.2药物和试剂 痛必定注射液由长春中医药大学药理实验室提供,批号20050609。RNA裂解液(上海华美生物工程公司)；总RNA提取试剂盒和RNA逆转录试剂盒；PCRMarker(华美公司产品)；Takara试剂盒(大连宝生物公司)；Primer由奥科生物工
8、程公司合成。 1.3取材7 1%异戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,快速取出腰段脊髓,放入液氮内保存；取材结束后,将标本放入-80℃冰箱待
