胆红素对新生儿脐血单核细胞凋亡、吞噬功能和表面分子cd14cd86+、hla－dr的影响

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3、收集脐静脉血，采用纤维连接蛋白结合法分离脐血单核细胞。流式细胞仪检测细胞纯度，台盼兰检测其活力。2胆红素孵育单核细胞，将上述分离的单核细胞分别置于含有不同浓度胆红素（0mg/dl、6mg/dl、9mg/dl、12.9mg/dl、18mg/dl）的牛血清白蛋白溶液中孵育1h，倒置显微镜下观察细胞形态学变化。3脂多糖刺激培养细胞，经胆红素孵育后，给予脂多糖（LPS，1ug/ml）刺激48小时，收集细胞。采用TUNEL法检测细胞凋亡率，双色免疫荧光抗体标记-流式细胞仪技术检测细胞表面分子的表达和荧光标记的葡聚糖吞噬试验检测细胞的吞噬功能。结果：①分离细胞后

4、，流式细胞仪检测CD14阳性细胞率为（93.99±2.48）%，0.4%台盼兰检测细胞活性为（92.61±2.39）%。②倒置显微镜下观测细胞，对照组细胞形态正常，胆红素组细胞发生锯齿样变，细胞被黄染易发生聚集，在胆红素为6mg/dl时已经存在，且随浓度的增加，越明显。③胆红素作用后检测细胞凋亡率结果显示，在胆红素浓度为9mg/dl、12.9mg/dl、18mg/dl时，在LPS存在的条件下，可引起CBMC凋亡的增加（P＜0.05）。随胆红素浓度的升高，这种作用随之增加。空白3对照组、LPS对照组、6mg/dl胆红素组和6mg/dl胆红素LPS组间比

5、较细胞凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）；9mg/dl胆红素组和12.9mg/dl胆红素组组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。胆红素浓度与细胞凋亡率的相关性分析结果显示，胆红素浓度与细胞凋亡率呈正相关，即随胆红素浓度的升高细胞凋亡率随之增加。④胆红素作用后检测细胞表面分子CD14CD86共表达率结果显示，胆红素浓度在等于或大于6mg/dl时，细胞表面分子显著受到抑制，18mg/dl胆红素组明显低于6mg/dl胆红素LPS共作用组。空白对照组和LPS对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；在LPS存在的条件下，6mg/dl组、9mg/dl

6、组和12.9mg/dl组组间两两比较CBMC的CD14CD86共表达率差异无统计学意义（P＞0.05）；9mg/dl组、12.9mg/dl组和18mg/dl组组间两两比较CBMC的CD14CD86共表达率差异无统计学意义（P＞0.05）。HLA-DR表达率检测结果显示，LPS对照组和各个浓度胆红素组均可以抑制细胞HLA-DR的表达，18mg/dl胆红素组明显低于6mg/dl胆红素LPS共作用组；6mg/dl胆红素组与6mg/dl胆红素LPS共作用组比较差异无统计学意义（P＞0.05），即经过低浓度胆红素孵育的CBMC，再接受LPS的刺激，胆红素对CB

7、MC的HLA-DR表达率抑制作用不受LPS的影响。在LPS存在的条件下，6mg/dl组、9mg/dl组和12.9mg/dl组组间两两比较CBMC的HLA-DR表达率差异无统计学意义（P＞0.05）；9mg/dl组、12.9mg/dl组和18mg/dl组组间两两比较CBMC的HLA-DR表达率差异无统计学意义（P＞0.05）。胆红素浓度与细胞表面分子的相关性分析结果显示，4胆红素浓度与细胞表面分子表达呈负相关，即胆红素对细胞表面分子的表达随胆红素浓度的升高，抑制作用随之增强。⑤单核细胞经不同浓度胆红素处理后检测吞噬阳性细胞率结果显示，LPS可以促进细胞

8、的吞噬功能。在胆红素浓度呈低水平（6mg/dl）时，无论有无LPS的存在，对细胞的吞噬功能有促进作用。18m