委陵菜抗糖尿病有效成分分离工艺的研究论文

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1、委陵菜抗糖尿病有效成分分离工艺的研究论文【摘要】目的研究中药委陵菜中抗糖尿病主要活性成分委陵菜黄酮的分离纯化工艺。方法通过不同大孔吸附树脂和聚酰胺的分离性能考察和各种分离参数优化，确立分离工艺。结果选用AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺色谱对委陵菜乙醇提取物进行分离，得到委陵菜黄酮组分。结论该方法稳定可行，适用于中药委陵菜中抗糖尿病活性成分的分离。【关键词】委陵菜；委陵菜黄酮；分离工艺Abstract：ObjectiveTostudythetechnologicalparametersofisolationofanti-diabetesconstituents,.freelPotenti

2、llachinesis.MethodsTheseparationprocessanceandtheoptimalseparationconditionsofmacroporousabsorptionresinandpolyamide.ResultsAB-8MacroporousResinandpolyamidePotentillachinesis.ConclusionTheextractionprocessisstableandsuitableforindustry.Keyl，加入已处理好的柱填料（AB-8、D101树脂，聚酰胺）5g（湿重），每隔30min振荡30s，持续2h，静

3、置24h，过滤，滤液以甲醇定容至100ml，以HPLC法测定委陵菜黄酮含量，然后浓缩至干，干燥，称重。计算委陵菜黄酮及提取物吸附量。2.1.2解吸将静态饱和吸附树脂加入95%乙醇50ml，每隔30min振荡30s，持续2h，滤出溶液，以95%乙醇淋洗两次，滤液定容至100ml，测定委陵菜黄酮的含量，然后浓缩至干，真空干燥，称重。计算提取物解吸率和委陵菜黄酮解吸率。结果见表1。表1静态吸附与解吸（略）2.2动态吸附与解吸［3］称取已处理好的柱填料50g（湿重），湿法装柱，以40%乙醇配置适量提取物样品溶液150ml上样，先以2倍量柱体积50%乙醇冲洗，再依次用70%，95%乙醇洗脱（

4、流速1.5BV/h），分别测定各洗脱溶液中委陵菜黄酮的含量和精密称定洗脱提取物的质量，计算提取物和委陵菜黄酮的动态吸附量和洗脱率。结果见表2。表2动态吸附与洗脱（略）从结果中可以发现，虽然聚酰胺对提取物的吸附量远高于其余两种树脂，但对提取物的洗脱率则很低。AB-8树脂与D101比较，D101黄酮洗脱率较高，但是黄酮吸附量和吸附样品中黄酮含量仅为AB-8的1/2，从分离纯化角度考虑，选择AB-8树脂较好。2.3AB-8树脂柱洗脱条件考察［4］2.3.1泄漏曲线及洗脱曲线取已经处理好的AB-8树脂50g湿法装柱，以30%乙醇溶解适量提取物，离心，上样，流速2BV/h，按倍量收集过柱液，

5、测定委陵菜黄酮及提取物的浓度。结果见图1～2。根据委陵菜黄酮和提取物的泄漏曲线，选择上样量为10倍量柱体积。将泄漏曲线步骤中吸附饱和的树脂分别以5倍量40%，50%，60%乙醇洗脱，测定洗脱液中黄酮单体的浓度。结果见图3。2.3.2吸附流速考察在“2.3.1”项下柱层析条件下，选择上样流速为1，2，3，4，5BV/h进行实验，考察吸附量。由图4可见，随着吸附流速的提高，委陵菜黄酮的吸附量呈逐渐下降，而提取物的吸附量则在4BV/h时达到最高。在委陵菜黄酮吸附量较高条件下，提取物吸附量较少，有利于委陵菜黄酮的纯化，故选择2BV/h作为吸附流速。2.3.3洗脱流速考察在“2.3.1”项下

6、柱层析条件下，选择洗脱流速为1，2，3，4BV/h进行实验，从图5可知，4种流速的洗脱均需要约5倍量柱体积才能洗脱完全。考虑到较高流速需要加压，因此选择与吸附流速同样的速度洗脱为宜。2.4第2次分离实验以AB-8树脂柱分离药材提取物，洗脱组分中委陵菜黄酮的含量由0.3%提高了10～12倍（近4%），但仍需要进一步分离。2.4.1AB-8树脂柱第2，3次分离考察取第1次AB-8树脂柱分离得到的委陵菜黄酮粗组分，按照上述条件依次进行2，3次分离，计算60%乙醇洗脱流分中委陵菜黄酮含量。结果见表3。表3AB-8树脂第2，3次纯化分离（略）由表3可知，AB-8树脂柱第2次分离，委陵菜黄酮的

7、含量提高了约2倍，而继续第3次分离时没有纯化效果，有必要选择其他的色谱填料进行纯化。2.4.2聚酰胺纯化取第1次AB-8树脂柱分离得到的委陵菜黄酮粗组分，以聚酰胺色谱柱分离，按照“2.3”的柱色谱条件依次以30%，50%，60%，70%，80%，95%乙醇洗脱，每个梯度5BV，测定各洗脱流分中委陵菜黄酮的含量。结果见图6。由图6可知，聚酰胺色谱柱分离委陵菜黄酮粗组分，委陵菜黄酮含量明显大于AB-8树脂柱的两次分离流分，而30%～60%乙醇洗脱流分中黄酮的含量达到18.