水蛭的抗早孕有效成分研究(ⅰ)

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1、水蛭的抗早孕有效成分研究(Ⅰ)【关键词】水蛭摘要目的:探索水蛭抗早孕有效成分。方法:通过有机溶剂沉淀方法初步对水蛭水煎剂不同成分进行分离，经蛋白质定性实验、IR和薄层色谱鉴别，并对分离出的各成分进行小鼠抗早孕实验。结果:分离得到的成分(Ⅱ)是一种活性蛋白质，有抗早孕活性。结论:水蛭中的抗早孕有效成分是一种蛋白质。关键词水蛭；抗早孕；有效成分；蛋白质StudyontheeffectiveconstituentsofantiearlypregnancyinWhitminapigraYANGJian,W

2、ANGXian,HEyunjiao（DepartmentofPharmacy，ThePeopleHospitalofWuhanUniversity，Wuhan,Hubei430060)AbstractObjective:Tostudytheeffectiveconstituentsofanti-earlypregnancyinWhitminiapigra.Methods:TheeffectiveconstituentsinWhitminiapigradecoctionwereobtainedthr

3、oughorganicsolventprecipitationandcharacterizedbyproteinqualitativetest,IRandTLC.Antiearlypregnancyexperimentswereconductedinrats.Results:Constituent(Ⅱ)obtainedfromWhitminiapigradecoctionwasanactiveproteinwithantiearlypregnancyactivity.Conclusion:Thee

4、ffectiveconstituentofantiearlypregnancyinWhitminiapigraisakindofactiveprotein.KeywordsWhitminiapigra;antiearlypregnancy;protein水蛭是传统的中药，本草纲目记载其有破血、逐瘀、通经和堕胎作用。近年对水蛭破血、逐瘀、通经方面成分研究有较多报道［1］，水蛭素被认为是世界上最强的凝血酶抑制剂，其药效学、药代动力学、临床实验及毒副作用都进行了广泛的研究。目前国内水蛭成分研究还是空白，

5、只有贾氏［2］等初步探讨过从活水蛭中提取抗凝血物质的方法，张氏［1］等对干水蛭进行了微量元素和氨基酸的分析［3］。水蛭水煎剂有较强的抗早孕作用，但至今其抗早孕作用的活性成分仍不清楚。本实验通过对水蛭水煎剂的化学成分进行分离，寻找其抗早孕的有效成分，对这一现象作出合理的解释，为开发新的抗早孕药物打下基础。1实验材料1.1药物水蛭(购于刘有余药材公司,经鉴定为宽体金线蛭Whitminiapigra干燥全体),化学试剂均为分析纯。1.2仪器SHZ-D（Ⅲ）型真空泵(巩仪英峪予华仪器厂)；RE-52C型旋

6、转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；JBZ-14H型磁力搅拌器（上海大中分析仪器厂）。ＩＲ由武汉大学测试中心测定。1.3实验动物30～35g成熟未生育的SD小白鼠（武汉大学医学院动物实验中心提供）。2实验方法与结果2.1提取分离　称取干燥水蛭200g，研成细粉，于烧杯中用蒸馏水400mL煎煮30min，纱布过滤，合并两次滤液，80℃浓缩为100mL溶液，离心，弃去沉淀。上清液放置过夜，次日再过滤，得滤液。向滤液中加等体积乙醇，有黑色粘稠沉淀（Ⅰ）析出，分离沉淀用50mL蒸馏水溶解，抽滤。滤液再用适量乙

7、醇沉淀，沉淀用蒸馏水反复冲洗，抽滤，真空干燥得黑色粉末（Ⅱ）2.4g。上述滤液放置过夜，次日将上清液浓缩至20mL，加入等体积丙酮，有淡黄色沉淀析出，抽滤，真空干燥得白色粉末0.76g(Ⅲ)。丙酮沉淀后滤液放置过夜，倾出上清液，加入4倍丙酮，有棕色沉淀析出，抽滤，真空干燥得1.5g（Ⅳ），滤液放置过夜，将上清液浓缩至50mL溶液（Ⅴ）。2.2药理实验［3］2.2.1抗早孕活性成分筛选　取体重30～35g未生育的成熟小鼠，以雌雄2∶1合笼，每天上午做阴道检查。小鼠妊娠成期为20d左右，1～5d为着床

8、期；6～9d为妊娠早期；10～14d为妊娠中期；15d后为妊娠晚期。以发现阴栓为受孕第1d。于受孕第6～9d给药，ip，bid，共1d。次日观察阴道出血情况，然后尾静脉注射2.5%膀胺兰的生理盐水溶液，10min后解剖检查子宫染成的着床点，凡无着床点且未出血的为空怀者。空怀者不列为观察范围。实验结果见表1。表1水蛭不同成分对小鼠早期妊娠的影响　略2.2.2成分（Ⅱ）抗早孕实验　方法同前，选择不同剂量的成分（Ⅱ），对照生理盐水组，作抗早孕实验，实验结果见表2。结果表明该成分的作用随剂