βcatenin在白血病细胞系中表达的研究

《βcatenin在白血病细胞系中表达的研究 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、βcatenin在白血病细胞系中表达的研究麦玉洁，邱录贵，李增军，李新，王国蓉，于珍，徐燕，王亚非，李茜【摘要】本研究检测βcatenin在白血病/淋巴瘤细胞系中的表达，探讨其与白血病的关系。采用半定量RTPCR、免疫细胞化学和I1640完全培养液中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱内培养。人白血病细胞系J61细胞由我所吴克复教授赠赠，源自1976年1名疑似急性髓单核白血病（AMML）患者，除需在IMDM中加入20％NCS外,其余培养条件同其他细胞系〔4〕。总RNA的提取收集1×106细胞，以TRIzoLreagent(Invitrogen公司产品)提取细胞总RN

2、A,氯仿相分离,异丙醇沉淀，乙醇洗涤RNA团块，干燥并DEPC水溶解RNA，用紫外分光光度法测定RNA的量，A260/A280鉴定RNA纯度。RTPCR以OligodT(18)法逆转录为cDNA，扩增βcatenin和内参照βactin。扩增条件:βcatenin：95℃30秒,55.5℃30秒,72℃30秒，共30个循环；βcatenin正义链：5＇AGCCGACACCAAGAAGCAG3＇,βcatenin反义链：5＇GGCCACCCATCTCATGTTC3＇，扩增长度808bp；βactin(作为内参)：95℃30秒,　60℃30秒，72℃30秒，共

3、25个循环，βactin正义链5＇ATCTGGCACCACACCTTCTACA3＇，βactin反义链5＇GTTTCGTGGATGCCACAGGACT3＇，扩增长度569bp。引物由上海Sangon合成，PAGE纯化。βcatenin的半定量分析取PCR产物5μl，在15g/L琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml溴化乙锭)上电泳(80V,30分钟)后,紫外灯下观察、照相，用KodakDigitalScience1DImageAnalysisSoftmol/LTris，pH8.0，150mmol/LNaCl，1%NP40,0.5%脱氧胆酸钠，0.1%SDS，1mmol/L

4、EDTA，100mg/LPMSF，1mg/LAprotinin，2mg/LLeupeptin，1mmol/LDTT），超声裂解，10000rmp离心10分钟，取上清，以Bradfordassay法测定蛋白浓度。取200μg总蛋白，进行聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳，电转至硝酸纤维素膜。5％脱脂奶封闭过夜后，加入一抗（1∶1000稀释）孵育2小时，用TBST洗涤。室温孵育二抗2小时,TBST洗涤后，用ECL法检测（SantaCruz公司）。统计学处理βcatenin相对表达量R>1.0认为高表达，0.6结果βcatenin基因在白血病细胞系中的表达在所检测的15种细胞系中都可

5、检测到βcatenin的表达，但程度不一。在U937、KG1a、Jurkat、K562、NamalRNA呈相对较低水平的表达(Rβcatenin蛋白在白血病细胞系中的表达采用、Daudi呈中等水平表达；在NB4、J61、LCLH中呈相对低水平的表达。Figure1.ExpressionofβcateninmRNAinleukemia/lymphomacelllines.Figure2.RelativeexpressionofβcateninmRNAinleukemia/lymphomacelllines.Figure3.Expressionofβcateninpr

6、oteininleukemia/lymphomacelllinesbyMMolt4、SUDHL4、和SUDHL5等部分白血病/淋巴瘤细胞系中可以检测到βcatenin的高表达，最近国内也有关于βcatenin蛋白在白血病原代细胞中表达增高的报告，并认为可能与细胞的增殖有关〔13〕。我们对包括U937、KG1a、Jurkat、K562、NamalRNA至少在某些白血病细胞中有中等至较高水平表达，包括髓系白血病细胞系如U937、KG1a和淋系白血病细胞系如Jurkat、K562等。M细胞的生长、增殖有重要的促进作用。目前，cCreaPD,TurckCorinPJ.βCate

7、ninsignalingandcancer.Bioessays1999;21:1021-10307Inagaa:correlationorprogressionandpostoperativesurvival.ClinCancerRes2002;8:450-4568LinSY,XiaeijerHP,etal.Illegitimateotesproliferationofmultiplemyelomacells.ProcNatlAcadSciUSA,2004;101:6122-612713陈胜