βcatenin在白血病细胞系中表达的研究论文

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1、βcatenin在白血病细胞系中表达的研究论文麦玉洁，邱录贵，李增军，李新，王国蓉，于珍，徐燕，王亚非.freelalos细胞中βcateninmRNA呈相对较低水平的表达。蛋白表达水平与mRNA表达水平结果一致。所检测的细胞系中，胞核中均可见βcatenin的表达，但程度不一;在U937、K562、KG1a和Jurkat细胞的胞核内可见大量分布。结论:βcatenin作为I1640完全培养液中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱内培养。人白血病细胞系J61细胞由我所吴克复教授赠赠，源自1976年1名疑似急性髓单核

2、白血病（AMML）患者，除需在IMDM中加入20％NCS外,其余培养条件同其他细胞系［4］。总RNA的提取收集1×106细胞，以TRIzoLreagent(Invitrogen公司产品)提取细胞总RNA,氯仿相分离,异丙醇沉淀，乙醇洗涤RNA团块，干燥并DEPC水溶解RNA，用紫外分光光度法测定RNA的量，A260/A280鉴定RNA纯度。RTPCR以OligodT(18)法逆转录为cDNA，扩增βcatenin和内参照βactin。扩增条件:βcatenin：95℃30秒,55.5℃30秒,72℃30秒，共30个循环；

3、βcatenin正义链：5′AGCCGACACCAAGAAGCAG3′,βcatenin反义链：5′GGCCACCCATCTCATGTTC3′，扩增长度808bp；βactin(作为内参)：95℃30秒,60℃30秒，72℃30秒，共25个循环，βactin正义链5′ATCTGGCACCACACCTTCTACA3′，βactin反义链5′GTTTCGTGGATGCCACAGGACT3′，扩增长度569bp。引物由上海Sangon合成，PAGE纯化。βcatenin的半定量分析取PCR产物5μl，在15

4、g/L琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml溴化乙锭)上电泳(80V,30分钟)后,紫外灯下观察、照相，用KodakDigitalScience1DImageAnalysisSoftmol/LTris，pH8.0，150mmol/LNaCl，1%NP40,0.5%脱氧胆酸钠，0.1%SDS，1mmol/LEDTA，100mg/LPMSF，1mg/LAprotinin，2mg/LLeupeptin，1mmol/LDTT），超声裂解，10000rmp离心10分钟，取上清，以Bradfordassay法测定蛋白浓度。取200μg总蛋白，进行聚

5、丙烯酰胺垂直板凝胶电泳，电转至硝酸纤维素膜。5％脱脂奶封闭过夜后，加入一抗（1∶1000稀释）孵育2小时，用TBST洗涤。室温孵育二抗2小时,TBST洗涤后，用ECL法检测（SantaCruz公司）。统计学处理βcatenin相对表达量R1.0认为高表达，0.6结果βcatenin基因在白血病细胞系中的表达在所检测的15种细胞系中都可检测到βcatenin的表达，但程度不一。在U937、KG1a、Jurkat、K562、NamalRNA表达水平一致：βcatenin在Jurkat、KG1a、U937、K562中高表达；在

6、HUT78、Raji、HL60、CEM、Daudi呈中等水平表达；在NB4、J61、LCLH中呈相对低水平的表达。Figure1.ExpressionofβcateninmRNAinleukemia/lymphomacelllines.Figure2.RelativeexpressionofβcateninmRNAinleukemia/lymphomacelllines.Figure3.Expressionofβcateninproteininleukemia/lymphomacelllinesbyMMolt4、S

7、UDHL4、和SUDHL5等部分白血病/淋巴瘤细胞系中可以检测到βcatenin的高表达，最近国内也有关于βcatenin蛋白在白血病原代细胞中表达增高的报告，并认为可能与细胞的增殖有关［13］。我们对包括U937、KG1a、Jurkat、K562、NamalRNA至少在某些白血病细胞中有中等至较高水平表达，包括髓系白血病细胞系如U937、KG1a和淋系白血病细胞系如Jurkat、K562等。M细胞的生长、增殖有重要的促进作用。目前，cCreaPD,TurckCorinPJ.βCateninsignalingandcanc

8、er.Bioessays1999;21:1021-10307Inagaa:correlationorprogressionandpostoperativesurvival.ClinCancerRes2002;8:450-4568LinSY,XiaeijerHP,