βcatenin在慢性粒细胞白血病中的表达及与bcr-abl的关系

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1、βcatenin在慢性粒细胞白血病中的表达及与bcr/abl的关系作者：李增军,邱录贵,李新,麦玉洁,王国蓉,于珍,王亚非,李长虹,李茜【摘要】本研究检测βcatenin在慢性粒细胞白血病（CML）各期中的表达情况，并与bcr/abl的表达变化相比较，为进一步探讨βcatenin在CML急性变中的意义提供依据。首先分离CML各期患者及正常供者骨髓单个核细胞（BMMNC），提取总RNA，逆转录为cDNA，用实时定量PCR的方法检测βcatenin的表达情况，同时检测部分标本bcr/abl的表达情况，分析二者在CML进展过程中的表达变化及两者的相关性

2、。结果表明：βcatenin在CML急性变期BMMNC的表达明显高于慢性粒细胞白血病（CML）慢性期（p＜0.001）、加速期（p=0.016）及正常人（p=0.004），而在后三者之间未见统计学差异。急性变期bcr/abl的表达明显高于慢性期（p=0.001）。βcatenin的表达量与bcr/abl表达水平有明显的相关性（r=0.620,p＜0.001）。结论：CML急性变期βcatenin的表达明显升高，并与bcr/abl的表达量有相关性。βcatenin的表达增高可能与CML急性变有关。【关键词】慢性粒细胞白血病Expressionofβ

3、CateninGeneinCMLandItsRelationshipedtoquantitativelydetecttheexpressionlevelofβcateninandbcr/ablindifferentphasesofchronicmyeloidleukemia(CML)andtoanalyzethEirpotentialrelationshipandsignificanceintheprogressionofCML．First,thetotalRNAisolatedfromBMMNCofpatientsequantitativePCRm

4、ethodaldonors（p=0.004）.Theexpressionofbcr/ablinblastcrisisofCMLaybeaccountpartlyfortheblastcrisisofCML.Keyatol2007;15(5):931-935L）急性变期的粒细胞-巨噬细胞、祖细胞中表达明显增高,并赋予后者异常增强的增殖能力和集落形成能力，它可能是CML急性变的重要机制。然而，βcatenin转录水平的研究目前还很少，本研究应用实时定量PCR的方法，从mRNA水平研究了βcatenin在CML各期中表达的差别，同时将βcatenin与C

5、ML特征性的融合基因bcr/abl的表达进行相关性分析，为进一步阐明CML急性变的机制提供新的探索。病例资料所有病例均来自中国医学科学院血液病医院门诊及住院患者，经骨髓细胞形态、细胞遗传学及染色体检查，符合慢性粒细胞白血病各期的诊断标准。所有慢性期患者均为初诊患者、急性变期及加速期患者病情进展后未经治疗或虽经治疗未获缓解的患者。在检测标本中，慢性期34例，加速期4例，急性变期10例，其中男31例，女17例，中位年龄42(23-71)岁。正常对照9例，均为造血干细胞移植的健康供者。试剂和仪器SYBRPremixExTaq试剂盒为TaKaRa公司产品，淋巴细

6、胞分离液（Ficoll）购自灏洋生物公司，TRIzoLreagent和MMLV逆转录试剂盒均为美国Invitrogen公司产品。96孔反应板及光学管（OpticalTubes）和PrismRealTime7500PCR扩增仪为美国AppliedBiosystems公司（ABI）产品。骨髓单个核细胞的分离、RNA提取和逆转录骨髓单个核细胞的分离CML患者或正常供者骨髓1-5ml,肝素抗凝,经FicollHypaque密度梯度离心分离单个核细胞（MNC），计数，洗涤后-80℃贮存备用。提取总RNA的逆转录(0.5-1)×107骨髓MNC，加入TRIzoL

7、reagent1ml，充分混匀，加入0.2ml氯仿，离心取上清；加入0.5ml异丙醇沉淀RNA,75%乙醇洗涤,干燥并DEPC水溶解，紫外分光光度测定RNA浓度及鉴定纯度，1%琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA质量。逆转录采用40μl体系，含RNA2μg，OligodT1μg，dNTP（10×）2　μl，DTT4　μl（10mmol/L），RNasin　20　U和MMLV200　U(均为Invitrogen公司产品)，按照说明书进行，所得cDNA于-20℃保存备用。实时定量PCR和分析采用实时定量PCRSYBRGreenI检测法。每份标本设3个平行对照反应孔。以G

8、APDH作为内参照，βcatenin，bcr/abl作为目的基因。引物设计设计