β-catenin在肺纤维化小鼠中的动态表达及意义

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1、江苏大学硕士学位论文β--catenin在肺纤维化小鼠中的动态表达及意义姓名：刘继柱申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：郑金旭20120612江苏大学硕士学位论文摘要目的：观察13．连环蛋白(p．eatenin，13．cat)在博莱霉素(bleomycin，BLM)致小鼠肺纤维化模型中各期的表达和可溶性Frizzled相关蛋白(SFRP4)干预后其表达的变化，进一步探讨其在肺纤维化上皮．间充质转化(epitelial．mesenchymaltransition，EMT)中的作用，从而更深入地了解肿纤维化的发病机制。方法：将60只小鼠按随机

2、数字表法分为3组：对照组(Cont组)、实验组(BLM组)和可溶性蹦zzl酣相关蛋白干预组(SFRP4组)，每组20只。其中BLM组和SFRP4组为博来霉素诱导的肺纤维化模型组(气管内注射BLM5rag·kg-I，O．04m1)，每组20只；Cont组为正常对照组(Cont组，20只)，同时间按同样方法气管内注入等体积(O．IMml)生理盐水。造模后于第2、4、6、8、10天，SFRP4组小鼠分别腹腔注射PBS稀释的SFRP4(101ag／m1)约0．2ml。Cont组及BLM组腹腔注射等体积生理敲水，每天1次。各组分别于第3、7、14和28

3、天各处死5只小鼠，取肺组织做病理切片，用苏木精．伊红(HE)染色观察小鼠肺泡炎症和肺纤维化的程度，以样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量；免疫组化检测不同组B．cat、间充质细胞标记物Q．平滑肌肌动蛋白(Q．SMA)及上皮细胞标记物上皮钙黏素(E．cadherin，E．cad)的表达，并应用WcstcmBlot法测定B．cat、a．SMA及E．cad的表达。结果：(1)Cont组的小鼠肺组织病理学检查无明显改变，仅炎性细胞少量浸润，无肺泡炎性渗出，肺泡『自J隔无增厚，没有成纤维细胞的增殖，无明显的肺纤维化样的改变。BLM组肺组织病理

4、切片随时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态改变，早期帅泡炎性渗出较重，肺泡间隔中有大量的炎性细胞浸润，肺泡结构变形。中晚期炎性渗出逐渐减轻，肺泡萎陷、消失，大小不等，但肺泡『日J隔逐渐增厚，可见成纤维细胞的大量增殖，大量宽带状及片状胶原纤维沉积，出现弥漫性纤维化惰变：BLM组的肺泡炎和肿纤维化评分均高于对照组和治疗组，有统计学意义(P<0．05或P<0．01)；SFRP4组病理学检查也按时『玎J顺序呈现由肺泡炎到肺纤维化的动念改变，但肺泡炎和肺纤维化的程度办较BLM组为轻(P<0．05或P<0．01)。(2)BLM组与Cont组相比，肺组织中羟

5、基腑氨酸含量第7天丌始上升，第28人达jiU峰值；与BLM绑l对照，在第7、14、28天时，SFRP4组与其有盟著差异(P<江苏大学硕士学位论文O．01)。(3)免疫组化示：E．Cad及IX-SMA的表达主要在细胞膜上，与Cont组相比，各时间点BLM组及SFRP4组的E．Cad蛋白表达减少，并呈逐渐减少的趋势，而Q．SMA蛋白表达则增多，并随着时问的推移其表达逐渐增多。p-cat其大部分位于细胞膜上，而很少一部分位于细胞质和细胞核中。与Cont组相比，BLM组及SFRP4组各时间点13．cat蛋白在细胞质及细胞核内的表达逐渐增加，BLM组较

6、SFRP4组较为显著。(4)Westernblot示：Cont组小鼠各时间点ix．SMA及E．cad蛋白表达差异均无显著性意义。BLM组a-SMA从3天起其表达逐渐增加，与Cont组相比，P<0．01，而E．cad蛋白表达随时问增加而逐渐减少，与Cont组相比，P<0．01；SFRP4组a．SMA的表达亦呈逐渐增加趋势，但较BLM组为轻，与BLM组相比，第14、28天P<0．05，E．cad蛋白表达随时『自J增加亦逐渐减少，但同时间点表达较BLM组表达为多，与BLM组相比，第7、14、28天P<0．05。(5)Westernblot示：Con

7、t组小鼠各时间点is．cat蛋白表达差异亦均无显著性意义。与Cont组相比较，BLM组13．cat的表达从第3天开始增高(P<0．05)，第14天达到高峰，第28天降低：SFRP4组D．cat的表达先增高后下降，但各时间点均高于Cont组(P

8、。结论：[3-catenin在肺纤维化形成过程中存在高表达。同时在肺纤维化进程中肺泡上皮细胞进行性减少，间质细胞逐渐增加，反映在作为上皮细胞标记物上皮钙黏素(E-c