蛇毒纤溶酶急性毒性试验研究

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1、蛇毒纤溶酶急性毒性试验研究【摘要】测定蛇毒纤溶酶的半数致死量（LD50）并研究蛇毒纤溶酶的急性毒性。方法小鼠单次静脉注射蛇毒纤溶酶，观察14天内的毒性反应和死亡情况并计算出LD50。结果蛇毒纤溶酶的LD50为24783u/kg，95%可信限为21519～28823u/kg，中毒死亡时间集中在给药后48h，其毒性靶器官主要是胃、十二指肠、空肠、肺、胰。结论蛇毒纤维蛋白溶解酶具有纤溶药相同的毒性症状，有出血倾向。【关键词】蛇毒纤溶酶急性毒性半数致死量【Abstract】ObjectiveTomeasurethemedianlethaldose（LD50）ofnevinfibri

2、nolyticenzymeandinvestigateitsacutetoxicityinmice.MethodsAftersingleintravenousdosing,thetoxicityreactionsandthenumberofdeathsofnevinfibrinolyticenzymeice,thentheLD50each,duodenum,jejunum,lungandpancreas.Thedeathfocuson48haftertheadministration.ConclusionNevinfibrinolyticenzymehasthesameto

3、xicityastheotherfibrinolyticenzymes,e;acutetoxicity;LD50蛇毒中含多种具有生物活性的酶、多肽和蛋白质,其特殊的功能已在科学研究和医疗实践中获得了广泛应用。利用蛋白质分离技术从蛇毒中高度纯化而得的蛇毒纤溶酶可直接溶解纤维蛋白凝块，可用于心脑血栓和心肌梗死的治疗。近年来未见对蛇毒纤溶酶毒性的研究报道，为此本文对蛇毒纤溶酶急性毒性进行了初步研究。1材料与方法1.1材料1.1.1动物NIH小鼠，SPF级，50只，雌雄各半，购自广东省医学实验动物中心〔实验动物合格证号：0026628，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2003-

4、0002，实验动物监测证号：粤监证字2007A004〕。1.1.2试剂和药物蛇毒纤溶酶（批号：070274，北京博康宁生物医药科技有限公司）；0.9％氯化钠注射液（批号：060626-07，昆明市宇斯药业有限责任公司）；甲醛溶液（批号：20061101-11，广州化学试剂厂）。1.1.3仪器全密封自动脱水机（ASP300，德国Leica公司）；平推式切片机（MicromMH400，德国Leica公司）；生物组织包埋机（LeicaEG1164，德国Leica公司）；病理图像分析系统（广州亿鸣公司）。1.2方法〔1,2〕选用检疫合格的NIH小鼠50只，将动物按体重、性别随机分为

5、5组，每组10只动物（雌雄各半），根据预试结果给药剂量设定为38000、30400、24320、19456、15565u/kg，给药容积为0.2ml/10g。给药后连续观察4h，如无异常则终止持续观察，改为每天观察1次，观察至给药后第14天，观察内容包括：动物外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便、给药局部、动物死亡数量、死亡时间、濒死前反应等。每组动物分别于给药前及给药后1、2、3、7、14天称体重6次。实验过程中因濒死而处死的动物、死亡的动物以及实验结束时仍存活的动物均进行大体解剖，肉眼观察主要脏器变化，若有异常均应记录并进行组织病理学检查。饲养室温度与湿度：20～2

6、6℃，40%～70%。1.3统计学分析实验数据采用平均值±标准差（x±s）表示，两组间均数比较用t检验，按Bliss法计算LD50及95%可信限。2结果2.1给药后毒性反应症状及LD50值38000u/kg剂量组动物给药后即刻出现少动、呼吸急促的现象，然后趴卧不动，约30min后有6只小鼠死亡，1只小鼠在给药后约1h死亡，3只小鼠在给药后约3h死亡，该剂量组动物死亡前主要反应为阵挛性抽搐、全身震颤、角弓反张、翻正反射消失，其中有2只动物鼻腔出血。30400u/kg剂量组动物给药后即刻亦出现少动、呼吸急促的现象，有4只动物在给药6h内死亡，动物死亡前主要反应为阵挛性抽搐、全身

7、震颤以及腹式呼吸。本组2只动物在给药后第2日死亡。24320、19456、15565u/kg剂量组动物给药后即刻出现少动、呼吸急促的现象，大部分动物约10min后恢复正常，动物死亡发生在药后48h内。从药后第3天到药后第14天，幸存动物活动状况良好，无异常表现。各组动物死亡时间分布情况见表1。用Bliss法计算蛇毒纤维蛋白溶解酶单次静脉注射给药NIH小鼠的LD50为24783u/kg，95%可信限为21519～28823u/kg，见表2。表1NIH小鼠单次静脉注射蛇毒纤维蛋白溶解酶后死亡情况分布表表2NIH小鼠单次