五步蛇蛇毒分离纯化中纤溶酶和类凝血酶的研究

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1、北京化工大学硕士学位论文五步蛇蛇毒分离纯化中纤溶酶和类凝血酶的研究姓名：付大雁申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：郭锴;赵伟20050425北京化工走学硕士毕业论文五步蛇蛇毒分离纯仡中纤溶酶和类凝盘酶的研究摘要凝血系统疾病死亡率高，危害大，愈来愈受到关注。目前我国每年至少约有500万此类患者需要治疗。蛇毒作为临床制剂与同类制剂相比，其效果良好，无严重的副作用，使用安全，在临床治疗上有很好的发展前景。国内关于蛇毒酶的利用多侧重于单一酶的研究，不能有效的开发利用蛇毒，造成了原料的浪费。因而，充分利用蛇毒，提高蛇毒制剂的产量，降低生产成本，使其更广泛的应用与临床

2、治疗，成为了重要的研究课题。本文中，五步蛇蛇毒通过SephadexG．75分子筛层析后，纤溶酶活性组分与类凝血酶活性组分形成了初步分离，两活性组分分别处于两层析峰中。通过DEAE阴离子交换层析后，纤溶酶活性和类凝血酶活性组分得到了进一步的分离纯化。对层析后的酶活组分进行纯度检测，C18HPLC图谱上均显示单一峰，SDS．PAGE图谱上均显示单一条带，纤溶酶分子量为24．1kD，类凝血酶分子量为14．4kD。本文通过大量的文献研究，仔细研究对比纤溶酶和类凝血酶的各种分离纯化方法，简化实验步骤，分别分离纯化了两种酶。对整个分离纯化过程进行分析，发现：两种酶比活力较高

3、，更重要的是两种酶的总活力回收率都有很大提高，其中纤溶酶的活力回收率达23．3％，类凝血酶活力回收率达34．5％。在蛇毒的分离纯化过程中，同时得到了两种酶，比较充分地利用了蛇毒，为进一步开发利用蛇毒探索了一条有效的途径。关键词五步蛇蛇毒；纤溶酶；类凝血酶；分离纯化苎室垡苎垄兰堡查璺些垒墨一一一一一PU弑lFlCATloNAN矜C珏A装AC譬嚣l娃ZA零lOXoFFIBRINoLYTICENZVMEANDTHROMBIN-LIKE嚣NZVMEF歉。醚AG王酲STRoDoNACU善USVENOMABSTRACTNowadays，thediseasesofbloodc

4、oagulationsystemhavebeenconcemedfortheirmortalityandmorbidity．TherearemorethanfivemillionpatientswhoweresufferingforthiskindofdiseaseseveryyearinChina．Manyapharmaceuticalsarerequiredtoberesearchedanddeveloped．Comparedwithcongenerproducts，venom，asakindofbiologicalpreparation，haslotsof

5、advantagessuchashighefficiency，fewerby．effects，andsecureusage，andwouldbeextensiveappliedinclinic．However，theresearchesabouttheutilizationofvenomenzymesaremostfocusedonasingleenzyme．Itwouldwastemanybiologicalresources．Thereforeitisnecessarythatasmanyaspossibleenzymesshouldbeisolatedfr

6、omthesamevenompreparation．AgkistrodonacutusvenomwasfractionatedbychromatographieswithSephadexG一75andDEAErespectively．Thetwopurifiedenzymesweresunectedto艘LCandSDS—PAGE．TheresultofexperimentsshowsthattheenzymesarebothsinglepeeksonC18HPLCandsinglebandsonSDS—PAGE．Themolecularmassoffibrin

7、olyticenzymeiS24．1kD，andthatofthrombin．1ikeEnzymeiS14．4kD．Thisarticledescribesasimplemethodtoisolatefibrinolyticenzymeandthrombin—likeenzymefromthesamevenompreparation．Theresultshowsthatspecialactivitiesofthetwodifferentenzymespurifiedwere．一．．苎主些三查兰壁主兰兰笙墨一一————definitelyrecovered．The

8、activityreco