大实验三米曲霉固体发酵制曲

《大实验三米曲霉固体发酵制曲》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、大实验三米曲霉固体发酵制曲1、学习固体发酵工艺2、制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力实验目的要求实验原理实验步骤1、制备麸皮固体培养基：25g麸皮，加15ml水（加水量40%～60%），拌匀；装茄瓶。2、灭菌：0.1Mpa灭菌20～30min，冷却至室温。已培养好的米曲霉孢子斜面一支，加入约10ml无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。注意：勿使孢子飘落实验室3、制备孢子悬液菌种：实验步骤(continued)实验步骤(continued)每茄瓶加入孢子悬液2ml，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸皮培养基混匀。

2、4、接种：28℃培养4天其间，于接种24～48h左右抖动茄瓶翻曲一次观察记录菌丝生长及孢子形成情况5、培养：实验步骤(continued)另一次实验实验步骤(continued)6、蛋白酶活力测定：1）粗酶液制备：向一茄瓶中加入无菌水约100ml，浸泡固体曲1h；过滤得粗酶液。2）倒平板：融化酪蛋白明胶双基质固体培养基，每人倒一平板。实验步骤(continued)3）打孔：打孔器经酒精燃烧灭菌后，每平板打1～3孔，并在酒精灯火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培养基微融，然后平放冷却。4）加样：往孔

3、内加入粗酶液适量（约100ul），可设对照。实验步骤(continued)5）培养（反应）：将加样后的平板小心平端放入30℃培养箱，放置20小时左右。6）观察结果：可直接观察透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板滴加少量10%三氯乙酸，以增强观察效果。实验结果实验报告1、实验原理、方法步骤、结果及分析2、思考题准备：1、10%三氯乙酸2、双基质固体培养基（以对应的L-R组配制，每L-R组配400ml，分装3瓶）配方：10g干酪素，10g明胶，18g琼脂，1000ml，pH7.0配法：干酪素先

4、用0.2NNaOH溶解，倒入热水中加热搅拌至完全溶解；适量1NHCl调至pH7.0；加入明胶和琼脂，继续加热至完全融化。附：大实验四“苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis;B.t）杀虫剂液体摇瓶发酵”方案设计研究内容：1）培养基组成对B.t芽孢形成的影响2）通气状况对B.t芽孢形成的影响以实验小组为单位，根据研究内容自行查阅资料，拟定实验方案，于下次实验课提交教师审阅、修改、确定实验方案。