花生过敏原酶联免疫分析方法的建立

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1、花生过敏原酶联免疫分析方法的建立-->1前言1.1食物过敏食物过敏广泛存在于世界各国。近年来，食物过敏患者逐渐增多，由于其症状多变，危害广泛，且很难根治，已成为世界医学界的难题。近10-15年由于过敏性疾病发病率增加、转基因技术的发展及转基因农作物的商品化，人们开始重新评价食品过敏问题[2]。食物过敏可能会诱发一些严重的过敏性疾病。通常表现为食用易过敏的食品就会发病，病症分为两种类型：速发型过敏反应和缓发型过敏反应。速发型过敏反应食用致敏食物2小时内会出现呕腹湾、发烧、呕吐现象；缓发型过敏反应食用致敏食物2天内会出现发痒、荨麻疫、皮肤潮红、严重者可出现过敏性休克或死亡等。

2、现今，高达2-6%的人口患有食物过敏或与食物抗原相关的疾病尤其是在过去20年内患病率逐渐上升。食物过敏的临床症状为从轻微的腹部不适到严重的致命作用[5]，但目前并没有具体治疗食物过敏的方法，避免接触有问题的食品是主要的防御手段。近几十年来，食物过敏的患病率以惊人的速度在西方增加，尤其是花生过敏，在21世纪早期患病率以高达2倍的速度增加，导致超过1%人口患病。英国1989-1995年间，3岁儿章的患病率从1.3%上升至3.2%;在美国1997-2002年间，年幼儿童花牛过敏患病率从0.4%增至到至0.8%;加拿大儿童花生过敏患病率为1.34%;同样在澳大利亚花生过敏患病率也

3、出现增加的趋势[7]。1.2食物过敏原及研究现状1.2.1食物过敏原食物过敏原能够引起机体过敏性反应。目前含有可导致过敏反应的食物过敏原已达到180种以上，常见的有以下几类：一、奶（牛奶、山羊奶）；二、树果（棒子、杏仁等）；三、鱼类（海水鱼、淡水鱼）；四、豆类（大豆、豌豆）；五、花生；六、麸质的谷类；七、禽蛋类；八、甲壳动物（虾、螃蟹、龙虾等）[8]。食物过敏原一般为分子量在10-70kDa的蛋白质或糖蛋白，氨基酸序列不统一。隐藏的食物过敏原也是食品安全中的是一个重要问题，因为它们可引起各种超敏性反应。一种过敏原它无法被识别或产品上无标签吋，被称为隐藏的过敏原。这种疏忽不

4、是有意的，但它们以很多方式隐藏在食品屮，例如，标签标识错误或容易引起过敏的食物污染到其它安全食品。同时，芙旧和欧盟的立法指出，食品标签只是指出在食品中添加了已知成分的过敏物质，不能防止意外存在的微过敏原。1.2.2食物过敏反应的形成机制从免疫学机制来看，位物过敏包括四类变态反应。其中火部分食物过敏是由IgE抗体介导的I型超敏反应，食物过敏引起的I型变态反应包括食物过敏原的致敏阶段、激发阶段及效应阶段。在致敏阶段，一定量的过敏原可诱导个体产生反应性IgE抗体，可诱导特异性B细胞产生IgE抗体应答，IgE通过血循环分布全身，并与肥大细胞表面特定的IgE受体结合，使机体处于致敏

5、状态。在激发阶段，机体再次接触到相同的过敏原时，通过特异性识别致敏细胞膜表面的IgE,诱导细胞释放炎症介质而触发食物过敏症，对效应组织和器官产生一定作用，并引起过敏反应[12]。虽然任何食物可引发过敏反应，但是鸡蛋、牛奶，花生、坚果、鱼类、贝类、小麦和大豆是最容易引起过敏反应的食物[13]。且大多数过敏反应是由蛋白质家族引起的[14]。在一项由Jenkins等[15]比较动物性食物过敏原和它们的人类同源物（考虑蛋白质家族的序列分析和进化关系），他们指出，蛋白质序列同源性大于人类同源物62%通常会引起过敏。主要的食物过敏原有着一些共同的特征，它们是水溶性的糖蛋白，分子量10

6、-70KD，及对热、酸和蛋白酶相对稳定。另外，如食物经加工处理，可影响其抗原性。有些研究者认为，由于食品加工的方式不同，花生的致敏性也不同。在西方国家他们通常食用烘烤的花生，花生过敏率较高。因为高温倍烧(180°C)的花生会发生Maillard反应，会增加稳定性和致敏性。而花生在中国主要是煮或油炸方式食用，因此具有较低的发病率[16-17]。另一些研究者认为，花生酱这类食品通过佐剂乳化后可增加致敏性。最近也有研究表明，70%-80%对牛奶鸡蛋过敏的幼儿却可以食用烘烤后的蛋白[18_19]。这一研究说明，幼儿产生的IgE抗体主要是针对食物蛋白质的构象表位，并说明他们成年后就

7、不会对这种过敏原产生过敏反应。这些不同的研究结果，可能是由患者的个体差异引起的。最近研究表明，某些糖蛋白的糖部分可能在食物蛋白致敏性中发挥了显著作用。Thomas等确定24名成年人摄取牛肉、羊肉或猪肉后3-6小后，出现荨麻疫，血管神经性水肿，过敏性休克。这些患者均发现有阳性皮试结果以及血清含有针对半乳糖基-a-l，3-半乳糖的IgE抗体。这是首次证明IgE抗体直接针对糖类的结合位点而导致过敏的。2材料与方法2.1实验材料2.1.1实验动物新西兰白兔，月龄3个月，体重1.5公斤，雄性；BALB/c小鼠，7-8周大，雌性。洁净等级