A-)酶联免疫分析

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1、小鼠卩淀粉样蛋白l-42(Api-42)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E10787m检测范围:15.6pg/ml-1000pg/ml最低检测限：3.9pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠API-42,且与其他相关蛋口无交义反应。有效期：6个月预期应用：EL1SA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中Apl-42含量。说明1.试剂盒保存：・20°C(较长吋间不用吋)；2-8°C(频繁使用时)。2.浓洗涤液低温保存会启盐析出，稀释时可在水浴屮加温助溶。3.中、英文说明书可

2、能会有不一致之处，请以英文说明书为准。4.刚开启的酶联板孔屮可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。概述A卩蛋A(P-amyoidpeptide)是1984年Glenne等发现的脑内神经炎斑的主要成分，它是一种由39〜43个氨基酸组成，具有卩折叠构型的蛋白，因此称之为卩•淀粉样蛋口。卩•淀粉样多肽l-42(Amyloidpl-42,简称Ap42)是老年斑的主耍成分，具有神经元毒性，是阿尔茨海默病(AlzhcimcfsDiscasc,AD)的主要致病原因。A卩1・42C端的10个氨基酸残基33-42及17-21的5

3、个氨基酸残基具有高度的疏水性,构成了AP1-42的疏水区；28-42氨基酸残基形成卩■折叠构象的可能性较大，而9・21的氨基酸残基也可能形成卩■折叠的构象，而卩■折叠的构象有利于Apl-42的聚集沉积而形成老年斑。由于Apl-42蛋白在AD发病中和免疫疗法中冇重要作用，因此进一步弄清Apl-42蛋白导致AD的详细发病机理及其在免疫疗法中的作用，对解决AD具冇重要意义。实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗AP1-42抗体的微孔中依次加入标木或标准品、生物素化的抗Apl-42抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TM

4、B显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样晶中的Apl-42呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assayplate)：—块(96孔)。2.标准品(Standard)：2瓶(冻干品)。3.样品稀释液(SampleDiluent)：1x20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent)：lx10m1/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRPFvidinDiluent)：lx10ml/

5、瓶。6.生物素标记抗体(Biotin・antibody)：lxl20j.il/瓶(1：100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRPrvidin)：lx120(11/瓶(1：100)8.底物溶液(TMBSubstrate)：UlOml/瓶。9.浓洗涤液(WashBuffer)：1x20ml/瓶，使用时每瓶用蒸懈水稀释25倍。1.终止液(StopSolution)：lx10ml/瓶(2NH2SCH)。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列町调节移液器及吸头，一次检测

6、样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸饰水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标木请于室温放置2小时或4°C过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于・20°C或・80°C保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于・20°C或・80°C保存，但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它牛物标1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于・20°C或・8（TC保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血

7、标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀釋倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程屮，M做好详细的记录。最示计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“NJ标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至lml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1000pg/ml,做系列倍比稀释后，分别稀释1000pg/mL500pg/ml,250pg/mh125pg/mL62.5pg/ml,31.2pg/ml,15.6pg/ml,样品稀释

8、液宜接作为标准浓度0pg/ml,临用前15分钟内配制。如配制500pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1000pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendor