草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立.pdf

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1、第51卷第5期湖北农业科学Vo1．51No．52012年3月HubeiAgriculturalSciencesMar．，2012草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立潘熙萍，楼佳俊，张高精，张丽莎，施曼玲(杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州310036)摘要：通过碳化二亚胺法将草甘膦(Glyphosate，GLY)分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原和包被原。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI—TOF-MS)检测表明，草甘膦与牛血清白蛋白和卵清蛋白的偶联比分别为11：1和9：1。合成的免疫原作用新西兰大白兔制备出草甘膦多克隆抗体，ELlSA检测抗体溶液效价为1

2、：1xlO’，该抗体不与草甘膦的结构类似物增甘膦和双甘膦起交叉反应。以此抗体建立了草甘膦间接竞争EUSA检测方法(ciELISA)，其线性范围为0．78～100g／mL，线性回归方程为y=15．85101眦+7．7805，R=O．9938。草甘膦的检测限为l0=1．15Ixg／mL，IC50=14．35Ixg／mL。在添加回收试验中，草甘膦添加值5和10g／g时，玉米粉中的草甘膦回收率为104．12％和81_37％，小麦粉中的回收率则分别为118．94％和为109．39％。结果表明，采用所制备的多克隆抗体而建立的草甘膦ciELISA方法可有效地应用于玉米粉和小麦粉中草甘膦的残留检测关键词：草甘

3、膦(Glyphosate，GLY)；多克隆抗体；间接竞争酶联免疫吸附法中图分类号：$482．4文献标识码：A文章编号：0439—8114(2012)05—1002—04EstablishmentoftheEnzyme-linkedImmunosorbentAssayforGlyphosateResiduesPANXi—ping，LOUJia-jun，ZHANGGao-jing，ZHANGLi-sha，SHIMan-ling(CollegeofLifeandEnvironmentalSciences，Hangzh0uNormalUniversity，Hangzhou310036，China)Ab

4、stract：Thediiminecarbonizationmethodswereusedtosynthesizeimmunogenandcoatingantigenbyglyphosatebeingconjugatedtoovalbumin(OVA)andbovineserumalbumin(BSA)，respectively．TheresultsshowedtheratiosofhaptentoBSAandOVAwere11：1and9：1bymatrix-assistedlaserdesorptionionization-timeofflightmassspectrometry(MALD

5、I-TOF—MS)．ThepolyclonalantibodiesagainstglyphosatewereproducedthroughimmunizingNewZealandwhiterabbitswiththeimmunogen．Thetiterofantibodyagainstglyphosatewas1：1xlObythetestoftheenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)．Theglyphosatepolyclonalantibodiesdidnotcross—reactwithglyphosineandN一(Phosphonomethy1

6、)iminodiacetie．AnindirectcompetitiveELISA(ciELISA)wasdevelopedforglyphosatedetection，whichhasadetectionlimit(ICl0)of1．15txg／mLandalinearworkingrangeof0．78~100Ixg／mLwithanIC50valueof14．35g／mL．Theregressionequationwasy15．8510lnx+7．7805，Rwas0．9938．When5and10Ixg／gglyphosatewasaddedintherecoveryexeperime

7、nts，therecoveriesofglyphosatewere104．12％and81．37％incornmealsamples，while118．94％and109．39％inwheatflourblanksamples，respectively．TheexperimentresultsrevealedthattheciELISAonthebasisofthepreparedantibodi