血清芽管实验检测白假丝酵母菌的药物敏感性

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1、血清芽管实验检测白假丝酵母菌的药物敏感性钟有添黄真王小丽马廉兰【摘要】目的了解泌尿生殖道感染白假丝酵母菌对黄连、黄芩、七叶一枝花和氟康唑注射液的敏感性，为临床有效控制其感染提供依据。方法采用白假丝酵母菌芽管药敏试验法，测定黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液对从泌尿生殖道感染标本中分离出的52株白假丝酵母菌芽管的最低抑制浓度。结果黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液，在一定的浓度下对泌尿生殖道感染白假丝酵母菌芽管有明显的抑制作用，其抑制芽管的最低浓度分别为1.25，5

2、，2.5mg/ml和0.125mg/ml。结论白假丝酵母菌芽管药敏试验法，可为临床快速筛选敏感药物；黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液对白假丝酵母菌有较好的抗菌活性。【关键词】血清芽管试验白假丝酵母菌黄连黄芩七叶一枝花氟康唑注射液药物敏感性抗菌活性白假丝酵母菌（Candidaalbicans）又称白色念珠菌，是常见的条件致病性真菌，其既可引起皮肤粘膜的感染，又可致内脏器官及中枢神经的感染〔1〕。近年来，随着广谱抗生素、皮质类固醇激素和免疫抑制剂的被广泛应用，白假丝酵母菌感染呈上长趋势

3、，并已跃居深部真菌感染的首位〔2〕。且耐药菌株逐年增加，给临床治疗带来极大困难。为了能及时向临床提供敏感药物，治疗白假丝酵母菌感染并减少耐药菌株的产生和播散，我们参照唐书谦等〔3〕推荐的白念珠菌芽管法药敏试验新方法，用黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液对白假丝酵母菌进行药物敏感性试验。现将结果报告如下：1材料与方法1.1菌株52株白假丝酵母菌分离自赣南医学院第一附属医院门诊送检的119例泌尿生殖道感染患者。1.2药物来源黄连、黄芩、七叶一枝花由赣南医学院第一附属医院中药房提供。氟康唑

4、注射液：2mg/ml，广东太阳神集团荔城制药厂，批号03061311）。1.3药物提取方法取黄连、黄芩、七叶一枝花各200mg，分别加适量50%乙醇浸泡12h，然后80°C水浴箱中热浸4h，滤去药渣，滤液用文火浓缩至10ml，制成浓度为20mg/ml的药液备用。1.4实验方法1.4.1试验管氟康唑注射液和黄连、黄芩、七叶一枝花提取物分别用生理盐水倍比稀释6次，氟康唑注射液浓度为2～0.03125mg/ml，黄连、黄芩、七叶一枝花提取物浓度为20～0.3125mg/ml。再分别取7种药物稀释液各0.5ml

5、加入盛有0.5ml新鲜兔血清的试管中，混匀。1.4.2对照管0.5ml生理盐水加0.5ml新鲜兔血清混匀。1.4.3菌液接种以上各管分别接种5×107CFU/ml白假丝酵母菌20μl混匀，置37°C温箱内孵育3h后取出观察。1.5结果判断1.5.1镜检芽管数与芽管生长的长度将芽管数、芽管生长的长度与对照管比较，一般超过菌体直径2倍以上，为正常生长芽管。芽管长度小于或等于菌体直径者，为受抑制芽管。1.5.2芽管计数按白细胞计数法，分别计算出以上4种药物7种不同稀释浓度出现的正常芽管和受抑制芽管的数量。1.

6、5.3药物敏感性判断无芽管生长者为敏感；有芽管生长，若受抑制芽管在100%以上者，为中度敏感；若受抑制芽管在50%左右者为轻度敏感；若与对照芽管长度基本一致者为不敏感。2结果2.1不同药物抑制芽管试验的敏感性比较结果见表1～4。结果表明黄连、黄芩、七叶一枝花50%乙醇提取物和氟康唑注射液，在一定的浓度下对泌尿生殖道感染白假丝酵母菌芽管有明显的抑制作用，其抑制芽管的最低浓度分别为1.25，5，2.5mg/ml和0.125mg/ml。2.2对照试验　芽管生长正常，一般超过菌体直径2倍以上。表1氟康唑注射液对

7、52株白假丝酵母菌的抗菌活性氟康唑注射液表2黄连对52株白假丝酵母菌的抗菌活性表3黄芩对52株白假丝酵母菌的抗菌活性黄芩浓度表4七叶一枝花对52株白假丝酵母菌的抗菌活性七叶一枝花浓度3讨论随着系统性真菌感染及耐药菌株的不断增多，借助药敏试验进行抗真菌药物的选择越来越被人们所关注〔4〕。本实验采用唐书谦等〔3〕推荐的白念珠菌芽管法药敏试验新方法，将一定浓度的黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液与血清混合，再接种一定量的菌液，置37℃温箱内孵育2～3h，观察白假丝酵母菌芽管的生长情况，最终

8、评估该药对白假丝酵母菌芽管的抑制程度。该法与琼脂扩散法相比，可缩短孵育时间(因常规白假丝酵母菌37℃孵育需48h，现只需孵育2～3h)，能快速筛选出对白假丝酵母菌有效的药物，这对泌尿生殖道白假丝酵母菌感染患者能及时得到有效治疗具有重要的临床价值。本实验结果表明不同菌株的白假丝酵母菌对药物的敏感性存在差异。从表1可看出，氟康唑注射液抑制芽管的最低浓度为0.125mg/ml。由于该药能特异、有效地抑制真菌的甾醇合成，可在全身组织广泛分布，半衰期