玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细结构的影响

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1、玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细结构的影响【摘要】　　目的测定玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细胞结构的影响。方法用含玉金方的血清培养人胚肺成纤维细胞，同时设空白对照组和福康乐阳性对照组，比较细胞传代情况和微细结构。结果玉金方组与阳性对照组细胞传代数均比空白对照组多，且细胞衰老现象比空白对照组出现的迟缓。结论玉金方胶囊有显著的体外抗衰老作用，也为其临床应用提供了血清药理学的依据。【关键词】玉金方人胚肺成纤维细胞抗衰老作用　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectof

2、YuJinFangcapsoncultivationandpassageandfinestructureofhumanembryoniclungfibroblast.MethodsTocultivatehumanembryoniclungfibroblastcontainingYuJinFang,meanberinYuJinFanggroupandpositivegrouporethanthatinblankcontrolgroup,andphenomenonofcellagingpharmacolo

3、gicalbasisforitsclinicalapplication.　　Keyanembryoniclungfibroblast;Anti-agingfunction　　随着人们生活水平的提高，青春常在成了人们的梦想。抗衰老的药物也随之不断地被研究出来。玉金方胶囊〔1〕是由CH3、海马、何首乌、黄精、狝猴桃等十几种名贵中药及生物抗氧化剂组成，是以中药为主西药为辅的复方制剂，主治因元气亏虚，肝肾不足所致的心悸、胸痹，用于动脉硬化，高脂血症，高血糖症及精力不足，老年斑，早衰等保健治疗。人胚肺成纤维细胞

4、常用于研究细胞的衰老水平〔2〕。本文用人胚肺成纤维细胞，就玉金方抗衰老作用进行了体外实验研究。　　1材料与仪器　　1.1动物家兔，体重2.0～2.5kg，由河南省实验动物中心提供。　　1.2药物与试剂玉金方胶囊，规格0.25g（由河南洛阳新春都生物制药有限公司提供，批号：061218），福康乐胶囊，规格每粒含盐酸普鲁卡因0.1g，泛酸钙0.005g（由上海新亚药业有限公司生产,批号：070130），人胚肺成纤维细胞（上海中科院细胞库提供），羧甲基纤维素钠，胎牛血清，链霉素，青霉素，α-MEM粉剂（美国

5、Cellgro公司），胰蛋白酶、KCl，KH2PO4，NaCl，NaHCO3，Na2HPO4·7H2O，戊二醛，磷酸盐缓冲液（PBS），锇酸，丙酮，环氧树脂。　　1.2.1培养液的制备α-MEM粉剂溶于三蒸水中，加链霉素100μg/ml和青霉素100μ/ml，用NaHCO3调pH至7.2～7.4，最后加入15%胎牛血清。　　1.2.2D-hank＇s的制备KCl0.4g，KH2PO40.06g，NaCl8.0g，NaHCO30.35g，Na2HPO4·7H2O0.06g溶于1L三蒸水中。　　1.2.3

6、胰酶的制备0.25g胰蛋白酶溶于100mlD-hank’s液中。　　1.3仪器低温离心机（德国SIGMA公司）、CO2恒温培养箱（艾拓思实验设备有限公司）、恒温水浴箱（杭州蓝天化验仪器厂），透射电子显微镜（日本日立公司）。　　2方法　　2.1含药血清的制备家兔24只，随机分为3组：空白对照组、阳性对照组（福康乐胶囊）、玉金方组，每组8只，雌雄各半，灌胃前12h禁食不禁水。空白对照组以2ml/kg1%羧甲基纤维素钠灌胃，阳性对照组以0.82g/kg·d1％羧甲基纤维素钠灌胃，玉金方组以0.82g/(kg

7、·d)玉金方1%羧甲基纤维素钠制成的混悬液灌胃，1次/d，连续7d，末次给药后2h自耳静脉取血，3000r/min离心10min后取血清，56℃灭活30min，0.22μm滤膜过滤除菌。　　2.2细胞的传代将人胚肺成纤维细胞培养于α-MEM培养液中，置于37℃饱和CO2培养箱中培养。当细胞于瓶底壁长成致密单层，进行传代，传代时弃去旧液，用吹打管以0.25%胰蛋白酶消化液反复有规律地吹打瓶壁细胞，制成单个细胞悬液，以1∶2分种传代于两个培养瓶中，于37℃饱和CO2培养箱中培养。当细胞传至30代时，取9瓶

8、，分为3组，分别为空白对照组、阳性对照组、玉金方组。空白对照组细胞的培养液不变；阳性对照组3瓶细胞培养液中分别加入最终浓度为20%，10%，5%的含福康乐的血清；玉金方组3瓶细胞培养液中分别加入最终浓度为20%，10%，5%的含玉金方的血清。观察细胞结构变化。　　2.3透射电子显微镜的制片参照文献的方法〔3〕，将细胞置于4℃环境中，500r/min离心6～8min，收集5×106个细胞，将细胞用PBS洗2次。将细胞悬浮于2.5%戊二醛中，固定30min，