玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细结构的影响论文

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1、玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细结构的影响论文【摘要】目的测定玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细胞结构的影响。方法用含玉金方的血清培养人胚肺成纤维细胞，同时设空白对照组和福康乐阳性对照组，比较细胞传代情况和微细结构。结果玉金方组与阳性对照组细胞传代数均比空白对照组多，且细胞衰老现象比空白对照组出现的迟缓。结论玉金方胶囊有显著的体外抗衰老作用，也为其临床应用提供了血清药理学的依据。【关键词】玉金方人胚肺成纤维细胞抗衰老作用Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofYuJinFangcapsoncultivationandpassageandfinestruct

2、ureofhumanembryoniclungfibroblast.MethodsTocultivatehumanembryoniclungfibroblastcontainingYuJinFang,meanberinYuJinFanggroupandpositivegrouporethanthatinblankcontrolgroup,andphenomenonofcellagingpharmacologicalbasisforitsclinicalapplication.Keyanembryoniclungfibroblast;Anti-agingfunction随着人们生活水平的提高，青

3、春常在成了人们的梦想。抗衰老的药物也随之不断地被研究出来。玉金方胶囊［1］是由CH3、海马、何首乌、黄精、猕猴桃等十几种名贵中药及生物抗氧化剂组成，是以中药为主西药为辅的复方制剂，主治因元气亏虚.freell和青霉素100μ/ml，用NaHCO3调pH至7.2～7.4，最后加入15%胎牛血清。1.2.2D-hank′s的制备KCl0.4g，KH2PO40.06g，NaCl8.0g，NaHCO30.35g，Na2HPO4·7H2O0.06g溶于1L三蒸水中。1.2.3胰酶的制备0.25g胰蛋白酶溶于100mlD-hank’s液中。1.3仪器低温离心机（德国SIGMA公司）、CO2恒温培养箱（艾拓

4、思实验设备有限公司）、恒温水浴箱（杭州蓝天化验仪器厂），透射电子显微镜（日本日立公司）。2方法2.1含药血清的制备家兔24只，随机分为3组：空白对照组、阳性对照组（福康乐胶囊）、玉金方组，每组8只，雌雄各半，灌胃前12h禁食不禁水。空白对照组以2ml/kg1%羧甲基纤维素钠灌胃，阳性对照组以0.82g/kg·d1％羧甲基纤维素钠灌胃，玉金方组以0.82g/(kg·d)玉金方1%羧甲基纤维素钠制成的混悬液灌胃，1次/d，连续7d，末次给药后2h自耳静脉取血，3000r/min离心10min后取血清，56℃灭活30min，0.22μm滤膜过滤除菌。2.2细胞的传代将人胚肺成纤维细胞培养于α-MEM

5、培养液中，置于37℃饱和CO2培养箱中培养。当细胞于瓶底壁长成致密单层，进行传代，传代时弃去旧液，用吹打管以0.25%胰蛋白酶消化液反复有规律地吹打瓶壁细胞，制成单个细胞悬液，以1∶2分种传代于两个培养瓶中，于37℃饱和CO2培养箱中培养。当细胞传至30代时，取9瓶，分为3组，分别为空白对照组、阳性对照组、玉金方组。空白对照组细胞的培养液不变；阳性对照组3瓶细胞培养液中分别加入最终浓度为20%，10%，5%的含福康乐的血清；玉金方组3瓶细胞培养液中分别加入最终浓度为20%，10%，5%的含玉金方的血清。观察细胞结构变化。2.3透射电子显微镜的制片参照文献的方法［3］，将细胞置于4℃环境中，50

6、0r/min离心6～8min，收集5×106个细胞，将细胞用PBS洗2次。将细胞悬浮于2.5%戊二醛中，固定30min，用PBS洗2次。将细胞悬浮于1%锇酸中，固定1h。配制50%，70%，80%，95%，100%丙酮，细胞从50%丙酮逐步移至100%丙酮，每次脱水15min，100%丙酮脱水2次。再将细胞置于丙酮－包埋剂（1∶1）中室温置换1h，然后用纯的包埋剂包埋在胶囊中，37℃过夜。次日升温至60℃，48h固化。取出包埋块，切片。经醋酸双氧铀饱和水溶液染色30min，蒸馏水漂洗，干燥。枸橼酸铅饱和水溶液染色15min，双蒸水漂洗，0.02mol/LNaOH分化，再用蒸馏水漂洗，干燥观察。

7、3结果3.1细胞的传代数空白对照组细胞平均传64代，阳性对照组细胞平均传71代，玉金方组细胞平均传71.3代。阳性对照组比空白对照组多传7代，而玉金方组又比阳性对照组多传0.3代。结果见表1。表1各组细胞传代数（略）3.2细胞的形态学变化3.2.1倒置显微镜观察30代人胚肺成纤维细胞生长迅速，细胞排列紧密，多呈放射状、编织状或漩涡状走行，有的交叉重叠生长。胞体呈长梭形或不规则三角形，胞质透明，突起