rphplc法测定六味地黄汤生物制剂中丹皮酚的含量论文

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1、RPHPLC法测定六味地黄汤生物制剂中丹皮酚的含量论文【摘要】目的建立测定六味地黄汤生物制剂中丹皮酚含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法：色谱柱为UltimateTMAQC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇水(体积比45∶55)为流动相，流速1mL/min，柱温30℃，检测波长274nm。结果丹皮酚的质量浓度在1.024～25.60μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9990，n=5),平均回收率103.3%，RSD为1.5%。结论该方法准确、专属性强、重复性好.freelpoL，暨南大学水生生物研究所提供)，甲醇(色谱纯)，

2、无水乙醇、三氯甲烷(分析纯)，自制双重蒸馏水。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液的制备取丹皮酚对照品1.3mg，精密称定，置50mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成质量浓度为25.60μg/mL的对照品溶液，密封保存，备用。2.1.2样品溶液的制备取一定量六味地黄汤生物制剂的样品溶液，调pH值至2，精密量取20mL，加入20mL无水乙醇，超声30min，3000r/min离心10min，滤过，取上清液，即得。2.1.3阴性对照溶液的制备取不含有牡丹皮光合细菌代谢的缺味六味地黄汤样品溶液，按“2.1.2”项方法制得阴性对照品溶液。2.2色谱条件与系统适

3、应性试验色谱柱为UltimateTMAQC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相为甲醇水(体积比45∶55)，流速为1mL/min，柱温为30℃，检测波长274nm，进样量10μL。取PSB溶液、阴性对照品溶液、对照品溶液与供试品溶液各10μL进样，结果表明，丹皮酚色谱峰分离度良好，理论塔板数以丹皮酚计算不低于3000，分离度大于1.5，阴性对照品无干扰，见图1。2.3线性关系的考察精密吸取“2.1.1”项对照品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、25.0mL置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别制得质量浓度为1.024、5.120

4、、10.240、15.360、25.600μg/mL的对照品溶液，分别进样10μL，在“2.2”项色谱条件下，测定丹皮酚的峰面积。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=97278X-19986,r=0.9990，表明丹皮酚质量浓度在1.024～25.60μg/mL范围内与峰面积具有良好线性关系。2.4精密度试验精密吸取同一对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样10μL，平行测定5次，测得丹皮酚平均峰面积为635245，RSD为1.20%。2.5稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10μL，分别于配制后0、2、4、8、12、24h进样，按

5、“2.2”项下色谱条件测定，测得样品中丹皮酚平均质量浓度为13.54μg/mL，RSD为0.63%。表明供试品溶液在24h内稳定。2.6重复性试验称取同一批样品6份，按“2.1.2”项制备供试品溶液，按“2.2”项色谱条件测定，测得样品中丹皮酚平均含量为13.55μg/mL,RSD为0.95%，表明样品重现性良好。2.7加样回收率试验取5份已知含量的供试样品25mL，加入一定量丹皮酚对照品，按“2.2”项色谱条件进行测定，以外标法计算丹皮酚的含量并计算丹皮酚的回收率，结果平均回收率为103.31%，RSD为1.5%,结果见表1。表1加样回收率试验结果2.8样品含

6、量测定取3批样品，按“2.1.2”项方法制备样品溶液，分别精密吸取供试溶液和对照品溶液各10μL，按“2.2”项色谱条件进样测定丹皮酚峰面积，采用外标一点法计算样品溶液中丹皮酚的含量，3批样品测定结果分别为13.50μg/mL、13.40μg/mL、13.40μg/mL，平均含量为13.43μg/mL。3讨论3.1试验中曾试用过三氯甲烷和无水乙醇作为提取丹皮酚的溶剂进行超声萃取，结果表明，三氯甲烷提取的回收率仅为40%，明显低于乙醇提取的回收率(105.0%)，故以乙醇作为光合细菌代谢六味地黄的丹皮酚的提取溶剂。3.2本方法具有分离效果好、准确性高等优点，可用于

7、六味地黄汤生物制剂中的丹皮酚含量测定。【