葛根素对体外培养人腹膜间皮细胞保护作用的研究

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1、葛根素对体外培养人腹膜间皮细胞保护作用的研究【摘要】目的:了解葛根素对体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性、氧化应激和转移生长因子β1（TGFβ1）分泌的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞，分对照组，腹膜透析液（PDS）组及葛根素1、2、3组（葛根素终浓度依次为50、100、200μg·ml-1）5组观察。检测各组间皮细胞的增殖活性，上清MDA、SOD、GSH水平以及TGFβ1的含量并进行比较。结果:在PDS干预下腹膜间皮细胞MTT还原能力明显下降，上清液MDA水平较对照组显著升高，SOD、GSH水平较对照组显著

2、降低。葛根素组MDA水平显著低于PDS组，SOD、GSH水平显著高于PDS组。腹膜间皮细胞在PDS干预下分泌TGFβ1较对照组显著增加，葛根素组TGFβ1分泌与PDS组比较有显著下降。结论:葛根素可以拮抗商业性PDS对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用，可以抑制氧化应激和TGFβ1分泌。【关键词】葛根素；人腹膜间皮细胞；转移生长因子β1；腹膜透析液；氧化应激　腹膜透析是终末期肾病患者首选的肾脏替代治疗方式之一[1]。然而随着透析时间的延长，腹膜纤维化形成成为导致患者腹膜功能丧失和透析退出的主要原因。研究表明，腹

3、膜透析液（peritonealdialysissolution,PDS）的生物不相容性导致的腹膜间皮细胞损伤是腹膜纤维化发生的起始因素。有效保护腹膜间皮细胞能够阻止或延缓腹膜纤维化的进展，给腹膜透析患者带来益处。我们通过观察葛根素对腹膜间皮细胞增殖活性、氧化应激以及转移生长因子β1（TGFβ1）分泌的影响，明确葛根素是否具有拮抗PDS对腹膜间皮细胞的损伤，从而保护腹膜间皮细胞，发挥潜在的抗腹膜纤维化作用。　　1材料与方法　　1.1材料2.5%BaxterPDS为广州百特医疗用品公司产品，pH5.2,内含葡萄糖0

4、.139mol·L-1、乳酸4.97mol·L-1；葛根素注射剂为浙江康恩贝制药股份有限公司产品，规格250mg·支-1；磷酸盐缓冲液（PBS）、胎牛血清（FBS）、RPMI1640粉剂以及胰蛋白酶等购自GIBCO公司；TGFβ1ELISA检测试剂盒购自晶美生物有限公司；四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲亚砜（DMSO）为Sigma公司产品；GSH、SOD、MDA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；微量蛋白BCA检测试剂盒购自碧云天生物有限公司；抗细胞角蛋白抗体、抗波形蛋白抗体、第八因子抗体和抗白细胞CD45抗体购

5、自北京中山生物技术有限公司；完全培养基为含20%FBS、105U·L-1青霉素和100μg·ml-1链霉素的RPMI1640培养液。全自动酶标仪(Sunrise)为Biobank公司产品。　　1.2方法　　1.2.1人腹膜间皮细胞的分离、培养与鉴定取非尿毒症和糖尿病择期手术病人（n=5）的网膜作为间皮细胞来源,按　　表1不同剂量葛根素对间皮细胞氧化应激的影响（略）　　与PDS组相比，1）P<0.01，2）P<0.05　　2.3上清液TGFβ1检测结果培养的腹膜间皮细胞经PDS和葛根素干预后，上清液中T

6、GFβ1含量变化见图2。上清液中TGFβ1含量PDS组为(21.23±5.79)ng·mg-1,较对照组[为（8.03±2.56）ng·mg-1]显著升高（P<0.01）；葛根素1、2、3组依次为（15.22±3.86）、（12.92±3.52）和（9.70±1.71）ng·mg-1，显著低于PDS组（均P<0.01）；葛根素组之间比较，葛根素3组显著低于葛根素1、2组（均P<0.01）。　　**与PDS组比较，P<0.01　　图2葛根素对间皮细胞TGFβ1分泌的影响（略）　　3讨论　

7、　腹膜透析作为有效的肾脏替代治疗方法已经被越来越多的尿毒症患者所接受，随着腹膜透析时间的延长，腹膜发生纤维化导致腹膜功能衰竭是患者退出治疗的主要原因之一。PDS具有明显的生物不相容性，其导致腹膜间皮细胞损伤被认为是腹膜透析相关腹膜纤维化的关键因素[3]。而有效保护腹膜间皮细胞则可以明显延缓腹膜纤维化的进程。大量的研究表明，葛根素可以拮抗多种因素尤其是高糖相关因素对细胞造成的损伤[46]。葛根素能否拮抗PDS对腹膜间皮细胞的损伤目前并无