葛根素对体外培养人腹膜间皮细胞保护作用的研究

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1、葛根素对体外培养人腹膜间皮细胞保护作用的研究【摘要】目的:了解葛根素对体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性、氧化应激和转移生长因子β1分泌的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞，分对照组，腹膜透析液组及葛根素1、2、3组5组观察。检测各组间皮细胞的增殖活性，上清MDA、SOD、GSH水平以及TGFβ1的含量并进行比较。结果:在PDS干预下腹膜间皮细胞MTT还原能力明显下降，上清液MDA水平较对照组显著升高，SOD、GSH水平较对照组显著降低。葛根素组MDA水平显著低于PDS组，SOD、GSH水平显著

2、高于PDS组。腹膜间皮细胞在PDS干预下分泌TGFβ1较对照组显著增加，葛根素组TGFβ1分泌与PDS组比较有显著下降。结论:葛根素可以拮抗商业性PDS对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用，可以抑制氧化应激和TGFβ1分泌。【关键词】葛根素；人腹膜间皮细胞；转移生长因子β1；腹膜透析液；氧化应激腹膜透析是终末期肾病患者首选的肾脏替代治疗方式之一[1]。然而随着透析时间的延长，腹膜纤维化形成成为导致患者腹膜功能丧失和透析退出的主要原因。研究葛根素对体外培养人腹膜间皮细胞保护作用的研究【摘要】目的

3、:了解葛根素对体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性、氧化应激和转移生长因子β1分泌的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞，分对照组，腹膜透析液组及葛根素1、2、3组5组观察。检测各组间皮细胞的增殖活性，上清MDA、SOD、GSH水平以及TGFβ1的含量并进行比较。结果:在PDS干预下腹膜间皮细胞MTT还原能力明显下降，上清液MDA水平较对照组显著升高，SOD、GSH水平较对照组显著降低。葛根素组MDA水平显著低于PDS组，SOD、GSH水平显著高于PDS组。腹膜间皮细胞在PDS干预下分泌TGFβ1

4、较对照组显著增加，葛根素组TGFβ1分泌与PDS组比较有显著下降。结论:葛根素可以拮抗商业性PDS对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用，可以抑制氧化应激和TGFβ1分泌。【关键词】葛根素；人腹膜间皮细胞；转移生长因子β1；腹膜透析液；氧化应激腹膜透析是终末期肾病患者首选的肾脏替代治疗方式之一[1]。然而随着透析时间的延长，腹膜纤维化形成成为导致患者腹膜功能丧失和透析退出的主要原因。研究表明，腹膜透析液的生物不相容性导致的腹膜间皮细胞损伤是腹膜纤维化发生的起始因素。有效保护腹膜间皮细胞能够阻止或延

5、缓腹膜纤维化的进展，给腹膜透析患者带来益处。我们通过观察葛根素对腹膜间皮细胞增殖活性、氧化应激以及转移生长因子β1分泌的影响，明确葛根素是否具有拮抗PDS对腹膜间皮细胞的损伤，从而保护腹膜间皮细胞，发挥潜在的抗腹膜纤维化作用。1材料与方法材料%BaxterPDS为广州百特医疗用品公司产品，,内含葡萄糖·L-1、乳酸·L-1；葛根素注射剂为浙江康恩贝制药股份有限公司产品，规格250mg·支-1；磷酸盐缓冲液、胎牛血清、RPMI1640粉剂以及胰蛋白酶等购自GIBCO公司；TGFβ1ELISA检测

6、试剂盒购自晶美生物有限公司；四甲基偶氮唑盐、二甲亚砜为Sigma公司产品；GSH、SOD、MDA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；微量蛋白BCA检测试剂盒购自碧云天生物有限公司；抗细胞角蛋白抗体、抗波形蛋白抗体、第八因子抗体和抗白细胞CD45抗体购自北京中山生物技术有限公司；完全培养基为含20%FBS、105U·L-1青霉素和100μg·ml-1链霉素的RPMI1640培养液。全自动酶标仪(Sunrise)为Biobank公司产品。方法人腹膜间皮细胞的分离、培养与鉴定取非尿毒症和糖尿病择期手术

7、病人的网膜作为间皮细胞来源,按文献[2]方法培养人腹膜间皮细胞。当细胞生长融合成单层时用%胰酶%EDTA消化,按1∶3传代,第3代用于实验。传代细胞经倒置显微镜观察和免疫组化抗细胞角蛋白抗体、抗波形蛋白抗体染色阳性,抗第八因子抗体和抗白细胞CD45抗体染色阴性鉴定。细胞增殖活力检测用含20%FBS的RPMI1640培养液将第2代消化细胞重悬成1×105ml-1的细胞悬液。置96孔培养板培养,每孔200μl，当细胞融合度达到80％左右时,用含%FBS的RPMI1640培养液同步24h后分5组观察,

8、每组设2个复孔。对照组为加入RPMI1640与完全培养基各100μl，PDS组为加入PDS与完全培养基各100μl；葛根素1、2、3组分别为含葛根素100、200、400μg·ml-1的PDS与完全培养基各100μl，葛根素终浓度依次为50、100、200μg·ml-1；37℃、5%CO2培养箱培养48h后弃上清,以完全培养基100μl和浓度为mg·ml-1的MTT(以mol,的PBS配制)100μl加入培养孔中继续培养3h,弃上清液,每孔加入DMSO00μl震荡混匀,取100μl