新生大鼠脑白质损害时神经胶质细胞凋亡与fas、caspase3蛋白的表达变化

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1、新生大鼠脑白质损害时神经胶质细胞凋亡与Fas、caspase3蛋白的表达变化作者：覃琳，熊英，卓平辉，阳倩【摘要】目的探讨Fas、caspase3在新生大鼠脑白质损害时神经胶质细胞凋亡中的作用。方法实验组和对照组各45只大鼠分别于缺氧缺血后30min、1h、4h、12h、1d、3d、7d、14d及21d处死，免疫组化(SP)法检测Fas、caspase3蛋白表达，TUNEL法测定细胞凋亡。结果新生大鼠脑白质损害时，细胞凋亡指数在缺氧缺血后4h开始显著增加，3d达到高峰(P<0.05)。对照组

2、未检测到Fas，实验组Fas蛋白在缺氧缺血后30min开始出现，1h增加，12h达高峰，并持续至3d(P<0.05)。实验组caspase3蛋白表达上调，于缺氧缺血后1d达到高峰，与对照组相比在1h、4h、12h、1d、3d、7d有统计学意义(P<0.05)。结论新生大鼠脑白质损害时，Fas、caspase3表达及凋亡指数显著增加，并有明显时序性，提示Fas途径激活caspase3后引起的细胞凋亡可能是新生大鼠脑白质损害的发病机制之一。【关键词】脑白质损害；脑室周围白质软化；Fas；c

3、aspase3；凋亡　　ExpressionofFas,caspase3protEinandchangeofapoptosis　inneonatalratsatterdamage　　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofFasandcaspase3onapoptosisintheatterdamage(D)neonatalrats.MethodsThepups(45ineachgroup)in,1h,4h,12h,1d,3d,7d,14d,21dofrecov

4、eryfromhypoxiaischemia(HI).Immunohistochemicaltechniqueattertissues.Apoptoticcellsentalgroupincreasedsignificantlyat4handreachedthepeakat3dafterHI.NoexpressionofFasentalgroupappearedat30minafterHI,increasedat1h,reachedthepeakat12handlastedtill3d.Caspase

5、3intheexperimentgrouponstratingsignificantdifferencesat1h,4h,12h,1d,3dand7dparedayparticipateinthepathogenesisofD.　　KEYD);periventricularleukomalacia;Fas;caspase3;apoptosis　　随着早产儿出生率及存活率的增加,早产儿脑损害的发病率亦逐年增加。脑室周围白质软化(periventricularleukomalacia,PVL)是早产儿最

6、常见的脑白质损害(atterdamage,D)。脑白质的不可逆损害还常常累及脑灰质[1]，从而对中枢神经系统的整体功能造成严重影响，出现痉挛性脑性瘫痪、认知及行为学异常等后遗症。缺氧缺血是PVL最主要的原因。目前研究发现在PVL中存在细胞凋亡，但对其凋亡途径研究较少。本研究在建立2日龄SD大鼠脑白质损害模型的基础上，采用TUNEL法检测脑室周围白质区神经胶质细胞的凋亡情况，免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Fas及caspase3的表达变化，以进一步了解脑白质损害神经胶质细胞的凋亡途径。　　1材料与方法　　

7、1.1动物选择及分组从四川省医学科学院实验动物中心购得清洁级2日龄(P2)SD大鼠12窝，每窝5-15只不等，共104只，体重5.4-8.6g，雌雄不限。将同窝生P2大鼠用抽签法随机分为两组：实验组(缺氧缺血组)57只和对照组(假手术组)47只。　　1.2动物模型的建立和标本制备参照Han等[2]的方法建立新生大鼠脑白质损害模型。将实验组新生鼠麻醉消毒后分离右颈总动脉，双线结扎，中间离断，术后恢复1h后，置于透明的密封箱内，输入6%(体积分数)氧气和94%(体积分数)氮气的混合气体，气体流量2L/min

8、，4h后取出放回常氧母鼠笼中饲养。整个手术及缺氧过程中，保持周围环境温度为30℃以上。对照组仅将缝线从右侧颈总动脉下穿过，不做结扎和缺氧，余同实验组。12只实验组大鼠因不能耐受手术及缺氧而死亡，对照组死亡2只。两组大鼠共90只(实验组和对照组各45只)分别于缺氧缺血后30min、1h、4h、12h、1d、3d、7d、14d和21d处死(每组各时间点5只)。缺氧缺血后不同时间点进行心脏灌注，以4℃40g/L多聚甲醛溶液(0.1mol/LPBS