梯度洗脱hplc法测定头孢唑肟钠的有关物质

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1、梯度洗脱HPLC法测定头孢唑肟钠的有关物质【摘要】目的建立梯度洗脱HPLC法测定头孢唑肟钠的有关物质。方法采用DiamonsilC18(4.6mm×150mm，5μm)色谱柱，0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用1mol/L磷酸调pH为4.0)为流动相A，甲醇∶乙腈∶水(250∶200∶50)为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml/min，检测波长254nm，柱温35℃。结果头孢唑肟在1.0～31.7μg/ml范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系，r=0.9999。结论本法简便，准确，可定量测定头孢唑肟钠的有关物质。

2、【关键词】梯度洗脱HPLC头孢唑肟钠有关物质DeterminationofrelatedsubstancesinceftizoximesodiumABSTRACTObjectiveToestablishagradientelutionHPLCmethodtodeterminetherelatedsubstancesofceftizoximesodium.MethodDiamonsilC18(4.6mm×150mm,5μm)columnobilephaseconsistedof0.01mol/Lpotassiumd

3、ihydrogenphosphatesolution(pHadjustedto4.0ol/Lphosphoricacid)asmobilephaseAandmethanol∶acetonitrile∶obilephaseB.Gradientelutionl/min.Thedetection.Thecolumntemperaturelforceftizoxime(r=0.9999).ConclusionThismethodpleandaccuratefordeterminationofrelatedsubstanc

4、esinceftizoximesodium.KEY10A数据处理机，7725型进样阀等；头孢唑肟钠原料(含量958μg/mg)及对照品(纯度998.1μg/mg)均由印度Orchid公司提供；甲醇和乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为分析纯，水为去离子水经MilliQplus纯水器处理。2色谱条件色谱柱：DiamonsilC18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钾(用1mol/L磷酸调pH为4.0)，流动相B：甲醇∶乙腈∶水(250∶200∶50)；流速1.0ml/m

5、in，梯度洗脱程序见Tab.1；检测波长254nm；柱温35℃；进样量10μl。3方法与结果3.1方法的专属性考察酸破坏取头孢唑肟对照品1mg，置10ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液1ml溶解，静置5min，用磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾3.63g，磷酸氢二钠10.73g，加水溶解并稀释至1000ml，pH7.0)稀释至刻度，摇匀。碱破坏取头孢唑肟对照品约1mg，置10ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml溶解，静置5min，加磷酸盐缓冲液(pH7.0)稀释至刻度，摇匀。加热破坏取供试品溶液(1mg/ml

6、)适量，置60℃水浴加热30min，冷却。光照破坏取供试品适量，置254nm光照射6h后精密称取适量，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)制成每1ml中约含1mg的溶液。分别取上述溶液进样，记录色谱图，结果头孢唑肟钠经酸、碱、加热、光照等破坏，所产生的杂质峰与主成分峰均能达到有效分离，表明方法的专属强。选择碱破坏溶液作为方法的系统适用性溶液(Fig.1)。3.2方法的耐用性考察选用大连依利特Hypersil、资生堂CapcellPakMGII、PhenomenexSynergi和DikmaDiamonsil色谱柱等4种不

7、同品牌、不同填料的C18色谱柱，取系统适用性溶液分别进样，结果4种色谱柱无论是已知杂质峰或未知杂质峰与主成分峰均能达到有效分离，且各峰的出峰顺序相同。3.3线性与范围取头孢唑肟对照品适量，精密称定，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解并稀释制成浓度为1.05、2.11、5.29、10.58、21.16和31.74μg/ml的溶液，分别进样，记录色谱图。以浓度(Y)对峰面积(X)进行线性回归，回归方程：Y=5.23×10-5X+0.1002r=0.9999头孢唑肟在1.0～31.7μg/ml范围内呈良好线性关系。3.4

8、检测限和定量限检测限按信噪比3∶1计为0.003μg/ml，定量限按信噪比10∶1计为0.01μg/ml。3.5精密度试验和稳定性试验精密称定头孢唑肟钠供试品适量，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解并稀释制成每亳升含1mg的溶液，重复进样6次，总杂质峰面积的RSD为6.1%(n=6)(按外标法以峰面积计算，总杂质含量为0.18%)，表明本法的重复性良好，适合测定杂质含量［5