HPLC法测定注射用头孢噻肟钠的有关物质.doc

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1、HPLC法测定注射用头孢噻肟钠的有关物质【摘要】改进HPLC测定注射用头孢噻肟钠中有关物质的方法。在美国药典和欧洲药典(英国药典)方法的基础上，优化了两种不同流动相系统，用梯度洗脱对注射用头孢噻肟钠的有关物质进行了分离。结果样品中各成分的分离度及检出灵敏度完全满足有关物质限度的测定要求。改进后的RPHPLC方法能更加真实有效的反映注射用头孢噻肟钠的有关物质含量，可有效控制产品的质量。【关键词】头孢噻肟钠；有关物质；高效液相色谱法ABSTRACTToimprovethemethodfordeterminationofrelatedsubstan

2、cesofcefotaximesodiumforinjection.OnthebasisofUSPandEP(BP)methods,differentmobilephasesystemswereoptimized.Gradientelutionwasappliedontheseparationofcefotaximesodiumanditsrelatedsubstances.Theresolutionandsensitivityofrelatedsubstanceswereacceptable.Thedetectionlimitwas100ng

3、.Thismethodwasfoundtobesimpleandselective.Itcouldbeusedtocontrolthequalityofproducteffectively.KEYWORDSCefotaximesodium;Relatedsubstances;HPLC注射用头孢噻肟钠(cefotaximesodium)为第三代头孢菌素，抗菌谱广，抗菌活性强，临床应用广泛［1，2］。《中国药典》1995年版采用微生物检定法测定头孢噻肟钠的含量，2000年版修订为HPLC法，但直到2005年版仍未对有关物质进行要求。美国、欧洲和英国

4、［3～5］等各国药典对注射用头孢噻肟钠有关物质的测定方法均有收载，且在欧洲药典中已确证头孢噻肟钠中可能存在4个杂质，国内尚未见有报道。为完善我国药典收载的质量标准，本文借鉴美国药典、欧洲药典和英国药典的方法，建立切实可行的控制头孢噻肟钠有关物质的方法。1仪器与试药1.1仪器岛津10A高效液相色谱仪(LC10ATvp高压泵，SIL10ADvp进样器，SPDM10APDA检测器，DGU14A在线脱气机)；MilliQ纯水机(Millipore公司)。1.2药品与试药注射用头孢噻肟钠(批号0406132)由哈药集团三精制药有限公司提供；注射

5、用头孢噻肟钠(批号050103)由浙江亚太药业股份有限公司提供；注射用头孢噻肟钠(批号050321025)由苏州东瑞制药有限公司提供。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。52方法与结果2.1色谱条件色谱柱为HypersilGold(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长235nm；流速1.0ml/min；进样体积10μl。流动相I(梯度洗脱)流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液∶甲醇(86∶14)；流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液∶甲醇(60∶40)。0.05mol/L磷酸盐缓冲液的配制取7.1g磷酸氢二钠至1000ml量瓶中，加

6、水溶解至接近刻度，用磷酸调节溶液pH至6.25，加水定容至1000ml)，梯度洗脱程序见表1。流动相II(等度洗脱)流动相为磷酸盐缓冲盐∶甲醇(85∶15)。磷酸盐缓冲液的配制3.5g磷酸二氢钾和11.6g磷酸氢二钠至1000ml量瓶中，加水溶解至接近刻度，调pH至7.0，加水定容至1000ml。2.2样品溶液的配制取头孢噻肟钠40mg至50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。2.3流动相I与流动相II的比较(1)分离效果的比较流动相I流动相I系统为美国药典分析头孢噻肟钠采用的系统。完全按照流动相I的梯度洗脱程序，发现主峰与前后相邻的杂

7、质不能很好的分离。针对分离情况，将梯度洗脱程序进行相应调整后，调整后的洗脱程序如表2所示。结果分离效果较好，主要分离出样品中含有的12个杂质(图1)。流动相II为欧洲药典(英国药典)在分析头孢噻肟钠采用的系统。完全按照流动相II的等度洗脱程序，发现主峰前分离出的杂质个数与流动相I的相同，但是主峰后的杂质在1h之内没有出峰。为了缩短分析时间，将主成分出峰后改为梯度洗脱，样品色谱图显示45min之内可以将主峰后的杂质完全洗脱，洗脱程序如表3所示，但是色谱基线漂移比较严重(图2)。(2)最低检出限的比较两种流动相在同一根色谱柱上得出的头孢噻肟钠的最低

8、检出限(以S/N=3表1流动相I梯度洗脱程序计)基本一致，为100ng。2.4两种流动相比较结果小结5通过对流动相I和流动相II在同一根色谱柱上分离效