小凹蛋白在清道夫受体ai介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用

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1、小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用作者：王蓉蓉，朱炳阳，严鹏科，廖端芳【关键词】小凹;蛋白；清道夫受体AI；氧化性低密度脂蛋白；巨噬细胞；泡沫细胞　　Roleofcaveolin1inSRAImediatedformationoffoamcellsderivedfrommacrophages　　【Abstract】AIM：Toinvestigatetheroleofcaveolin1inscavengerreceptorai(SRAI)mediatedformationofmacrophagederivedfoamcells

2、inducedbyoxidizedloacrophagesg/LoxLDLfordifferenthours.Next,macrophagesg/LoxLDLtreatmentfor24h.eanentgroups).OilredOstainingshoentgroupandSRAIantisenseoligonucleotidesgroupformedlesslipiddropletsthanoxLDLtreatmentgroupdid.CONCLUSION:Thereappearsanegativerelationshipbetulationoflip

3、idladenfoamcells.　　【Keyacrophage　　【摘要】目的：研究小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用.方法：用75mg/L氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)与巨噬细胞共同孵育不同时间.清道夫受体AI反义寡核苷酸、P38阻断剂SB202190预处理巨噬细胞，然后给予75mg/LoxLDL处理24h.APK抑制剂SB202190能明显抑制清道夫受体AI的表达，而增加小凹蛋白的表达.SB202190处理组细胞内胆固醇含量为（173±14）mg/g，与oxLDL处理组比较显著减少（P<0.01），细胞内脂滴亦

4、明显减少.结论：小凹蛋白与清道夫受体AI协同参与了oxLDL诱导的巨噬细胞泡沫化的形成过程.　　【关键词】小凹;蛋白；清道夫受体AI；氧化性低密度脂蛋白；巨噬细胞；泡沫细胞　　0引言　　泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化发生发展的核心环节.巨噬细胞和平滑肌细胞表面的清道夫受体AI（scavengerreceptorAI,SRAI）能不断摄取修饰的脂蛋白，致使胆固醇及胆固醇酯在细胞内聚集，是泡沫细胞形成的重要机制之一［1］.同时，氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）损伤细胞的胆固醇自平衡机制，抑制胞内胆固醇流出，是泡沫细胞形成的另一重要机制［2］.但细胞摄取胆固醇和胆

5、固醇酯的同时，为什么会导致胆固醇流出障碍尚不清楚.小凹（Caveolae）及小凹蛋白（caveolin1）是存在于细胞膜上的特异性内陷结构，在介导细胞内胆固醇的转运和流出、维持细胞内外胆固醇平衡过程中起着重要的作用［3-4］.本研究我们探讨了小凹蛋白在SRAI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料小凹蛋白1抗体(sc2894，Sigma公司，美国)、SRAI（2F8）抗体（Serotec公司,英国）；P38阻断剂SB202190（Calbiochem公司，美国）.其他试剂均为国产分析纯.鼠源单核细胞源性巨噬细胞RAEM培

6、养液调细胞密度至1×107/L，24h后换入1mL/L小牛血清的DMEM培养液，处理前细胞静止24h.实验分为：空白对照组、oxLDL处理组、SRAI正义寡核甘酸处理组、SRAI反义寡核甘酸处理组及SB202190处理组.　　1.2.2低密度脂蛋白的制备及修饰正常人血浆低密度脂蛋白采用序列超速离心法制备［5］.所得天然低密度脂蛋白置于PBS溶液中，4℃透析36h；再放入含10μmol/LCuSO4的PBS溶液（pH7.2），37℃透析20h进行氧化修饰.oxLDL置于100μmol/LEDTA的PBS中，4℃透析24h，终止氧化.　　1.2.3SRAI寡核

7、苷酸的设计和合成SRAI反义寡核苷酸（SRAIASODN）序列为：5′TACCTCGTCACCCTAGTGAAA3′.为了排出SRAIASOND可能的非特异性作用，设立了SRAI正义寡核苷酸（SRAINSOND）对照序列.SRAINSOND的序列为：5′ATGGAGCAGTGGGATCACTTT3′.寡核苷酸均进行全硫代磷酸化修饰，由上海生工生物工程公司合成.使用时SRAIASOND和SRAINSOND的终浓度均为10μmol/L.　　1.2.4L/L异丙醇固定1min，油红O染色10min，蒸馏水冲洗3次，每次1min，苏木素染色5min，分色和返蓝后，

8、HPIAS1000型图像分析系统收集图像.　　1.2.6细胞内胆固