丹参多酚酸盐对单核细胞分化为泡沫细胞过程中清道夫受体a表达的干预作用

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1、万方数据出丕医堑兰QQ!堡笙兰!鲞笠堡2塑丹参多酚酸盐对单核细胞分化为泡沫细胞过程中清道夫受体A表达的干预作用高玉琪啦。吴宗贵¨。梁春1。陈英剑2，张红明2。李晓燕2(1第二军医大学长征医院，上海200003；2济南军区总医院)[摘要]使用佛波醇酯(PMA)诱导THP．1细胞分化为巨噬细胞，将其分为对照组、氧化低密度脂蛋白(OX．LDL)组、OX-LDL+丹参多酚酸盐组(低、中、高浓度组)，应用流式细胞仪测定巨噬细胞sR—A表达水平。结果镜下观察到单核细胞株THP-I在PMA诱导下转变为泡沫细胞；

2、OX．LDL处理组sR．A蛋白表达水平较对照组明显增加(P<0．01)；丹参多酚酸盐组较其他两组均明显减弱(P均<0．01)，且随浓度增加SR．A表达明显减弱(P均<0．01)。认为OX—LDL能够明显刺激巨噬细胞表达SR．A，丹参多酚酸盐能够下调Og-LDL刺激的巨噬细胞表达SR—A，可能是其抗动脉粥样硬化斑块形成的机制之一。[关键词]丹参多酚酸盐；巨噬细胞；清道夫受体A；动脉粥样硬化；氧化性低密度脂蛋白[中图分类号】R543[文献标识码】B[文章编号]1002-266X(2008)42-006

3、94)2研究表明，单核细胞转变为巨噬细胞、泡沫细胞是早期动脉粥样硬化(AS)形成的关键环节⋯。清道夫受体(SR)是巨噬细胞表面的糖蛋白受体，其中清道夫受体A(SR—A)是巨噬细胞SR的主要活性成分，其在巨噬细胞吞噬脂质的过程中不受细胞内胆固醇的负反馈调节，观察SR—A在巨噬细胞转变为泡沫细胞过程中表达和活性的变化对阐明AS发病机制具有重要意义。丹参多酚酸盐是从传统中药丹参中提取的水溶性成分，具有活血化瘀、抗氧化和抗氧自由基的作用，其对巨噬细胞SR—A作用如何，国内外少见报道。本研究通过观察丹参多酚

4、酸盐对单核细胞株THP一1分化为巨噬、泡沫细胞过程中SR．A表达的影响，在细胞水平探讨其抗AS可能的作用机制。1材料与方法1．1材料与试剂THP—l细胞购自中国医学科学院基础所细胞室，丹参多酚酸盐标准品购自上海绿谷制药有限公司；氧化低密度脂蛋白(OX—LDL)购自北京协和医科大学，RPMI购自美国Gibco公司，胎牛血清购自天津灏洋生物科技有限公司，佛波醇酯(PMA)购自美国Sigma公司，PEanti—mouseSR—A购自美国Biolegend公司。1．2方法1．2．1细胞培养与分组THP—l

5、细胞加入10％胎牛血清RPMIl640培养液(培养液中加入青霉素、链·通讯作者霉素各1．0×105U／L)，37℃、5％C02培养箱培养，维持细胞密度(1—3)X109／L，每4—5天换液1次，传至2～3代用于实验。将换代培养的THP一1细胞稀释成1×106／L，每孔500一接种于24孔培养板。THP一1细胞于含PMA160nmol／L、0．1％BSA的无血清RPMll640培养基中培养48h，细胞分化为巨噬细胞。将其分为对照组、OX—LDL组、OX—LDL+丹参多酚酸盐组，每组设3个复孔。对照组

6、：THP一1细胞加入PMA160nmol／L刺激48h分化成巨噬细胞。OX—LDL组：上述巨噬细胞弃培养基，加入0．1％BSA的无血清RPMll640培养基与60mg／LOX—LDL共培养24h。OX．LDL+丹参多酚酸盐组分为低、中、高浓度组，加人丹参多酚酸盐终浓度分别为50、150、450mg／L。1．2．2巨噬细胞表面SR-A表达检测用1：250胰酶消化并收集各组巨噬细胞，离心弃上清，加入PBS制成悬液，洗涤2次，弃上清后分别加入PEanti—mouseSR—A10山，室温避光孵育30min

7、，上流式细胞仪检测。1．3统计学方法应用SPSSll．0软件进行数据处理，结果以孑±s表示，采用完全随机设计的方差分析。尸≤0．05为有统计学意义。2结果2．1光镜下表现400倍光镜下THP．1细胞呈悬浮状态，为圆形或卵圆形。PMA刺激后细胞由悬浮状态转为贴壁状态，形态学上呈梭形、椭圆形或伸出伪足，细胞体积增大，表明THP．1细胞已转变为巨69万方数据噬细胞，0．2％台盼兰染色证实细胞活力为99％。与OX—LDL孵育24h后，尼罗红染色证实细胞中形成大量脂质小滴，表明已转变为泡沫细胞。2．2各组S

8、R-A蛋白表达水平比较见表l。表1各组SR．A平均荧光强度比较(％，i±s)注：与对照组比较，’P<0．01；与傀一LDL组比较，6P<0．01；与丹参多酚酸盐低浓度组比较。▲P<0．01；与丹参多酚酸盐中浓度组比较，。P