白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响

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1、白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响作者：余海波,潘承恩,吴武军,赵四海,张慧峰【摘要】目的：观察白藜芦醇（resveratrol,Res）对体外人肝癌细胞系SMMC7721细胞增殖及基质金属蛋白酶9（matrixmetalloprotEinase9,MMP9）表达的影响，初步探讨Res抑制肝癌细胞侵袭转移的机制。方法：应用不同浓度的Res分别作用于人肝癌细胞系SMMC7721细胞24、48和72h，采用甲基噻唑基四唑比色试验（methylthiazolyltetrazolium,MTT）观察Res对SMMC772

2、1细胞增殖的影响；反转录聚合酶链反应（reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RTPCR）检测MMP9mRNA的表达；蛋白印迹分析（MP9蛋白表达情况。结果：Res对SMMC7721细胞有增殖抑制作用，且呈量效和时效关系；经Res作用后，SMMC7721细胞MMP9mRNA和蛋白表达均明显下降（P＜0.05）。结论：Res对肝癌细胞的生长具有抑制作用，且能下调其MMP9的表达，可能具有抑制肝癌细胞侵袭转移的作用。【关键词】白藜芦醇;肝癌;基质金属蛋白酶9　　Objectiv

3、e:ToobservetheeffectsofresveratrolonproliferationofhumanhepatocellularcarcinomacelllineSMMC7721cellsandexpressionofmatrixmetalloprotEInase9(MMP9)invitro.　　Methods:SMMC7721cellsethylthiazolyltetrazolium(MTT).TheexpressionofMMP9mRNAinedbyreversetranscriptionpolymerase

4、chainreaction(RTPCR).MMP9proteinedependenteffects.Moreover,bothMMP9mRNAexpressionandMMP9proteinproductionarkedlyreducedafterresveratroltreatment.　　Conclusion:ResveratrolcaninhibittheproliferationofSMMC7721cellsanddoedthatresveratrolmaysuppresstheinvasionandmetastas

5、isofhepatocellularcarcinoma.　　Keyatrixmetalloproteinase9　　原发性肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，术后5年生存率低，仅为25%～39%［1］。侵袭转移是影响肝癌预后的主要因素。因此，阐明肝癌侵袭转移的发生机制，寻求有效的抗侵袭转移治疗措施，对改善肝癌患者预后具有重要意义。白藜芦醇（resveratrol,Res）是一种从葡萄、虎杖等植物中分离提取的一种多酚类化合物。近年来的研究表明，Res有抗炎、抗氧化、改善微循环和调节脂质代谢等众多生物学活性。深入研究发现其具有抗肿瘤作用［2

6、］，特别是对于肝癌细胞，Res有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用，但目前鲜有抑制肝癌侵袭转移的报道。本实验通过研究Res影响肝癌细胞生长和基质金属蛋白酶9（matrixmetalloproteinase9,MMP9）表达的情况，初步探讨了Res抑制肝癌细胞侵袭转移的可能性。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　1.1.1细胞株人肝癌细胞株SMMC7721为西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科实验室传代保存，接种于含有10%新生牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RPMI1640培养液中，在37℃、5%CO2及完全

7、饱和湿度条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。　　1.1.2试剂Res购自美国Sigma公司；优级新生牛血清，购自兰州民海生物工程有限公司；RPMI1640培养基，购自美国Gibco公司；逆转录试剂盒、PCRMix及蛋白marker购自Invitrogen公司；鼠抗人MMP9抗体购自美国Neomarker公司，羊抗鼠二抗购自深圳晶美公司。　　1.2实验方法　　1.2.1甲基噻唑基四唑比色试验取对数生长状态良好的SMMC7721细胞，制备细胞悬液，调整细胞浓度后加入96孔板，使每孔细胞数达到5×103，培养24h贴壁后无血清培养基同步

8、培养24h。然后加入终浓度分别为10、50、100、200、500μmol/LRes的RPMI1640培养基，并同时设空白对照孔和阴性对照孔，每组设4个复孔。作用24、48、72h后，每孔分别加入5mg/m