白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响论文

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1、白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响论文余海波,潘承恩,吴武军,赵四海,张慧峰【摘要】目的：观察白藜芦醇（resveratrol,Res）对体外人肝癌细胞系SMMC7721细胞增殖及基质金属蛋白酶9（matrixmetalloproteinase9,MMP9）表达的影响，初步探讨Res抑制肝癌细胞侵袭转移的机制。方法：应用不同浓度的Res分别作用于人肝癌细胞系SMMC7721细胞24、48和72h，采用甲基噻唑基四唑比色试验（methylthiazolyltetrazolium,MTT）观察Res对SMMC7721细胞增殖的影响；反转录聚合酶链反应（rev

2、ersetranscriptionpolymerasechainreaction,RTPCR）检测MMP9mRNA的表达；蛋白印迹分析（MP9蛋白表达情况。结果：Res对SMMC7721细胞有增殖抑制作用，且呈量效和时效关系；经Res作用后，SMMC7721细胞MMP9mRNA和蛋白表达均明显下降（P＜0.05）。结论：Res对肝癌细胞的生长具有抑制作用，且能下调其MMP9的表达，可能具有抑制肝癌细胞侵袭转移的作用。【关键词】白藜芦醇;肝癌;基质金属蛋白酶9Objective:Toobservetheeffectsofresveratrolonprolifera

3、tionofhumanhepatocellularcarcinomacelllineSMMC7721cellsandexpressionofmatrixmetalloproteinase9(MMP9)invitro.Methods:SMMC7721cellsethylthiazolyltetrazolium(MTT).TheexpressionofMMP9mRNAinedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).MMP9proteinedependenteffects.Moreover,bothMM

4、P9mRNAexpressionandMMP9proteinproductionarkedlyreducedafterresveratroltreatment.Conclusion:ResveratrolcaninhibittheproliferationofSMMC7721cellsanddoedthatresveratrolmaysuppresstheinvasionandmetastasisofhepatocellularcarcinoma.Keyatrixmetalloproteinase9原发性肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，术后5年生存率低.freelat

5、rixmetalloproteinase9,.freell青霉素和100U/ml链霉素的RPMI1640培养液中，在37℃、5%CO2及完全饱和湿度条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。1.1.2试剂Res购自美国Sigma公司；优级新生牛血清，购自兰州民海生物工程有限公司；RPMI1640培养基，购自美国Gibco公司；逆转录试剂盒、PCRMix及蛋白marker购自Invitrogen公司；鼠抗人MMP9抗体购自美国Neomarker公司，羊抗鼠二抗购自深圳晶美公司。1.2实验方法1.2.1甲基噻唑基四唑比色试验取对数生长状态良好的SMMC7721细胞，制备细胞悬液，

6、调整细胞浓度后加入96孔板，使每孔细胞数达到5×103，培养24h贴壁后无血清培养基同步培养24h。然后加入终浓度分别为10、50、100、200、500μmol/LRes的RPMI1640培养基，并同时设空白对照孔和阴性对照孔，每组设4个复孔。作用24、48、72h后，每孔分别加入5mg/ml甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetrazolium,MTT）20μl，37℃孵育4h，弃上清，每孔加入150μl二甲基亚砜。平板摇床轻微振荡10min使结晶溶解，应用BioRad全自动酶标仪于波长490nm处测得每孔的吸光度（opticaldensity,OD）。实验

7、重复3次。计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率=［1－（实验组OD－空白对照组OD）/（阴性对照组OD－空白对照组OD）］×100%。1.2.2反转录聚合酶链反应SMMC7721细胞常规消化后以105/ml加入各培养瓶，常规培养24h后贴壁。更换无血清培养基同步培养24h。然后加入含有不同浓度Res的RPMI1640培养基培养24h，收集各组处理的细胞，用Trizol试剂一步法提取细胞的总RNA，逆转录合成cDNA。取1μlcDNA产物、12.5μlPCRMix、MMP9和磷酸甘油醛脱氢酶