二氮嗪预处理对肝硬化大鼠肝脏的保护作用

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1、二氮嗪预处理对肝硬化大鼠肝脏的保护作用作者：史卫海，孙亚伟，徐学忠，戎亚雄，李文美【摘要】目的探讨采用线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP通道)选择性开放剂二氮嗪(DE)进行预处理能否模拟缺血预处理(IP)对硬化肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法雄性肝硬化SD大鼠随机分为5组(每组8只)。IP组以肝缺血5min作预处理；DE组以静脉注射DE作为预处理；DE+5-HD组是在DE组基础上再予静注mitoKATP通道选择性阻滞剂5-hydroxydecanoate(5-HD)进行预处理;对照组(C组)

2、以静注等量生理盐水作为预处理;上述4组均在预处理后行肝缺血45min再灌注60min;缺血方式均为70%肝脏热缺血。假手术组（S组）仅行开腹，不作任何其他处理。完成预定实验操作后分别取血用于血清谷丙转氨酶(ALT)与乳酸脱氢酶(LDH)检测，切取肝组织用于测定ATP酶活力、湿重/干重(ethodsMaleSDratslydividedintofivegroups(n=8ineachgroup).Pretreatmentiafor5minentg/kgintravenouslyinjectionentitoKATPcha

3、nnelsinhibitor5-hydroxydecanoate(5-HD)baseduponDEgroupentalsalineinequalvolumeasacontrolgroup（Cgroup）.Thefourgroupsmentioned-aboveiafor45minafterpretreatment,then,50minutesreperfusionedonthem.Allofratsischemia.Theadditionalfifthgroupofratsoperation(Sgroup)，inonl

4、yanesthesiaandlaparotomyedeasures.Bloodandlivertissueinethebiochemistrylevelsandobservepathologicalchanges.ResultsTheactivitiesofALT，LDH，ATPaseandthelevelsofg2+-ATP酶及Ca2+Mg2+-ATP酶活性。1.4.3肝水肿评价切除肝左叶，称量湿重(×0.5cm×0.2cm组织块，10%中性甲醛固定，制成石蜡包块，切片，苏木素-伊红染色，光镜观察显微结构变化。切取S

5、组、C组、IP组、DE组大鼠肝左叶约1mm×1mm×1mm组织块，4%戊二醛固定。取材完成后同批进行以下处理：锇酸后固定2h；乙醇丙酮依次梯度脱水，每级10min；丙酮环氧树脂混合液浸泡;纯环氧树脂包埋液浸泡3h；环氧树脂液包埋聚合成块；修块，超薄切片；铅铀双重染色，透射电镜观察。1.5统计学方法结果以x±s表示，用SPSS11.5forWindo.3讨论Murry等[1]在对狗心脏进行交替5min的缺血与5min的再灌注4次后，再使心脏经受一次40min的缺血与4d的再灌注，结果显示经预先短暂缺血处理的心肌坏死面积相

6、对于未作此处理的可减少75%，遂将此方法称为缺血预处理(IP)。近年的研究表明IP对心脏以外许多器官的I/R损伤同样具有保护效应，即IP现象具有器官的普遍性。已有研究报道IP对正常与肝硬化肝脏的I/R损伤均具有明显的保护作用[5-6]。IP效应是机体对I/R损伤的一种内源性调控保护作用，其发生机制目前尚不十分清楚。近年的研究显示，mitoKATP通道的开放可能在心肌的IP效应中起重要作用，使用DE进行预处理可模拟出与IP相似的保护作用。药理学研究已发现肝脏与心肌组织中mitoKATP通道数量相近，且该通道在肝脏与心脏无

7、明显药理性差异[7]。但mitoKATP通道在肝硬化肝脏IP效应中是否具有与在心脏中相似的作用，使用mitoKATP通道选择性开放剂DE在肝硬化肝脏能否同样模拟出IP的保护作用？目前尚未见这方面的研究报道。本实验结果表明:IP对大鼠硬化肝脏的I/R损伤具有明显的保护作用，具体表现在反映肝细胞损害的血清酶指标（AST，LDH）和肝组织学结构损伤较对照组均明显改善。使用DE进行药物预处理可模拟出与IP相似保护作用，而使用特异性的mitoKATP通道阻滞剂5-HD又可阻断DE预处理的这种保护效应，表明mitoKATP通道的开

8、放可能参与了IP作用[5]。mitoKATP通道的开放是通过何种途径介导了IP保护作用，其具体的发生机制目前还不很明确。通过对心肌的实验研究，有报道认为可能有以下的几种作用途径：①使得线粒体通透性转换孔发生变化，加速释放I/R引起的线粒体内过多的Ca2+和（或）减少Ca2+的进入，减轻I/R时线粒体的Ca2+超载；②使得线粒体基质