rphplc法测定复方青骨凝胶中大黄素的含量论文

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1、RPHPLC法测定复方青骨凝胶中大黄素的含量论文【摘要】目的建立测定复方青骨凝胶中大黄素含量的方法。方法采用RPHPLC法，以ethodThesamplem×150mm,5.0μm)columnbyusingmethanolobilephase.ThedetectionandfloL·min-1.ResultThelinearrangeofsinomenineethodissimple，rapidandaccurateiningthecontentofemodininFufangQinggugel.Keyodin复方青骨凝胶是在全国十

2、佳女中医师、我院中医科杨嘉珍主任医师多年有效治疗腰腿痛的中药汤剂验方的基础上，以青风藤、大黄、四方木皮、杜仲、骨碎补等19味中药配伍，并以卡波姆为辅料制成的、具有缓释作用的新型的复方中药外用凝胶剂.freel32数据处理系统），TU1901紫外可见分光光度计（苏州市莱顿科学仪器有限公司）。大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110757-200206），甲醇（色谱纯）；磷酸(分析纯)，水为重蒸水。复方青骨凝胶（本院自制，批号：060603，060819，061103，070314，070723，070805）。2方法与结果2.1色

3、谱条件及系统适用性试验色谱柱：m×150mm,5.0μm)；流动相为甲醇水磷酸（体积比80∶20∶0.1）；检测波长：440nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃。在此色谱条件下，大黄素的保留时间约为11.5min。色谱图见图1。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品8.81mg，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得质量浓度为0.3524mg/mL的大黄素对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备精密称取复方青骨凝胶约8.0g置干燥锥形瓶中，加入甲醇15mL，超声提取15min，放冷至室温，过滤

4、，滤液置50mL量瓶中。重复超声提取3次，合并滤液并用甲醇定容至50mL，混匀，溶液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。2.2.3阴性样品制备按处方制备不含大黄药材的阴性样品，按“2.2.2”项方法制成阴性样品溶液。A.大黄素对照品B.样品C.阴性样品图1高效液相色谱图（略）Fig.1HPLCchromatogramsofsamples2.3标准曲线的制备分别精密吸取大黄素对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，分别进样10μL，以大黄素的进样量(m)为横坐标，

5、峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线，结果回归方程为：A＝2.48×106m-2.35×104(r＝0.9999)，表明大黄素的进样量在0.3524～1.7620μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.4精密度试验精密吸取大黄素对照品溶液(质量浓度为0.7048mg/mL)10μL，在上述色谱条件下重复进样6次，测定峰面积，结果其峰面积的RSD＝1.04％（n＝6）。2.5稳定性试验精密吸取新配制的供试品溶液（批号：070314），每隔1h进样10μL测定，连续测定5次，测定结果的RSD＝1.08％（n＝5）。表明供试品溶液在5h内稳定性良好。

6、2.6重复性试验取同一批样品（批号：070314）6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定含量，结果RSD＝1.83%（n＝6），表明本方法的重复性良好。2.7加样回收率试验精密称取6份已知含量的样品(批号：070314，含量为0.0901mg/g)，每份约5.0g，精密加入浓度为0.3524mg/mL的对照品溶液1.0mL，按“2.2.2”项下“精密加入甲醇15mL”起操作，同法制成供试液，在上述色谱条件下进样10μL，按“2.8”项下方法测定、计算，结果见表1。大黄素的平均加样回收率为101.99％，RSD＝2.79%

7、（n=6）。表1加样回收试验结果（略）Tab.1Recoveryresults(n=6)2.8样品含量测定取不同批号样品按“2.2.2”项下方法制备供试液，在上述色谱条件下，分别精密吸取大黄素对照品溶液及供试品溶液各10μL，进样，测定各自峰面积，按外标峰面积法计算样品中大黄素的含量。结果见表2。表2样品含量测定结果（略）Tab.2Resultsofsampledetermination(n=3)3讨论3.1文献［1-6］报道，大黄素的检测波长为254nm或440nm。为确定本实验的检测波长，我们将大黄素对照品在200～600nm进行扫描，

8、结果发现，大黄素在254nm和440nm均有吸收，如图2，但供试品溶液在254nm波长处色谱峰受杂质峰干扰较大，定量不准确，故本实验选择440nm作为检测波长，从而排除杂质的干扰