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1、瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌Survivin表达的影响论文邢立强，赵建清，李旺，孙黎【摘要】目的研究瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞株的抑制作用及对Survivin表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物处理NCI-H520细胞，分别用MTT法检测肺癌细胞抑制率、半定量RT-PCR检测SurvivinmRNA水平以及用I1640培养基5ml，瓶盖微松，放置37℃，5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中，细胞培养至对数生长期。消化、计数，调整细胞浓度至5×104个/ml，将其接种至96孔培养板中
2、。1.4MTT法检测NCI-H520细胞抑制率将细胞接种至96孔板，每孔100μl;置CO2培养箱中继续培养24h后,于96孔板中依次加入不同浓度的瑞香狼毒水提取物(5，0.5，0.05g/ml)每一浓度设4个复孔，另设空白组和对照组。继续培养4，8，12，24h后每孔加入MTT试剂30μl混匀，置CO2培养箱中继续培养4h后弃上清，每孔加二甲基亚砜100μl，10min后用酶标仪在492nm发射波长下读数，计算细胞抑制率。抑制率的计算：抑制率=1-(OD处理组-OD空白组/OD对照组-OD空白组)。1.5逆转录聚合
3、酶链反应(RT-PCR)Trizol一步法提取不同浓度瑞香狼毒水提取物作用不同时间的细胞总RNA，取1μg总RNA用RT-PCR试剂盒进行逆转录，PCR扩增Survivin，同时扩增β-actin作为内参。引物由大连宝生物工程公司合成，Survivin引物序列为F：5'-CCCTGCCTGGCAGCCCTTTC-3'R：5'-CTGGCTCCCAGCCTTCCA-3'所扩增片段为188bp。β-actin引物序列为F：5'-GGGAAATCGTGCGTGACATT-3'R：-CGGACTCGTCATACTCCTGCT
4、TG-3'所扩增片断大小为512bp。产物经2%的琼脂糖凝胶检测，紫外灯下观察并拍照。1.6TT法检测瑞香狼毒水提取物处理4，8，12，24h后的各组细胞毒性分析结果显示，瑞香狼毒对该细胞株有明显的生长抑制作用，浓度越高作用时间越长抑制作用越明显。2.2瑞香狼毒对NCI-H520细胞株SurvivinmRNA表达的影响将NCI-H520细胞株用不同浓度的瑞香狼毒处理4，8，12，24h后，按Trizol试剂盒说明提取总RNA，然后用反转录试剂盒把mRNA转录成cDNA，用Survivin和β-actin的引物对各样品
5、的cDNA进行扩增，扩增完毕后用2%的琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明Survivin的表达在mRNA水平上无明显改变。2.3瑞香狼毒对NCI-H520细胞株Survivin蛋白水平表达的影响将NCI-H520细胞经瑞香狼毒提取液处理4，8，12，24h后，用,BrayF,FerlayJ,etal.GobalCancerStatistics,2002J.CACancerJClin,2005,55(2):74.2江苏新医学院.中药大辞典(下册)M.上海:上海人民出版社,.freelofantitumoractionofPK
6、Cactivator,gnidimacrinJ.IntJCancer,1998,77(2):243.4冯威健,池川哲郎,吉田光二.瑞香狼毒提取物尼地吗啉的抗癌活性J.中华肿瘤杂志,1995,17(1):24.5YoshidaM,Fenged.1997，3(8):917.7FalleniM,PellegriniC,MarchettiA,etal.Survivingeneexpressioninearly-stagenon-smallcelllungcancerJ.JPathol，2003，200(5):620.8Ati
7、kcanS,UnsalE,DemiragF,etal.CorrelationbetallcelllungcancerJ.RespirMed.2006，100(12):2220.9FanJ,allcelllungcancer,ameta-analysisofpublishedliteraturesJ.LungCancer，2008：11.10邢立强，李旺，李鸿君，等.瑞香狼毒提取物对肺癌细胞超微结构的影响J.时珍国医国药，2007，18(8)：1844.
