硒化壳聚糖诱导人早幼粒白血病细胞凋亡的研究论文

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1、硒化壳聚糖诱导人早幼粒白血病细胞凋亡的研究论文邓守恒，曹凤军，蔡晓军，王贤和，陈萍【摘要】目的探讨硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法应用SRB法和集落形成法检测硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖的抑制作用；应用流式细胞法检测药物对细胞的促凋亡作用；应用PUS公司）；Mod550型全自动酶标仪（美国Bio-Rad公司）；EpicsEliteESP型流式细胞仪（美国Coulter公司）。1.3细胞人早幼粒白血病细胞株HL60引自福建省血液病研究所。2方法2.1细胞培养HL60细胞培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素和2U/ml

2、谷氨酰胺的RPMI1640培养基内，于37℃，饱和湿度，5%CO2条件下培养,细胞接种24h后即处于指数生长期。2.2SRB法测定硒化壳聚糖对细胞的抑制作用［4］收集对数生长期细胞以全培养液稀释成5×104个/ml单细胞悬液，接种于96孔细胞培养板，每个浓度复种4孔，每孔180μl，每孔加入不同浓度硒化壳聚糖20μl，对照组加入同量培养液，置37℃，5%CO2，饱和湿度的培养箱中孵育48h后，每孔小心加入预冷的80%醋酸50μl，静置5min后再将平板移至4℃放置1h，倒掉固定液，用去离子水洗5遍，甩干，空气干燥，每孔加入100μlSRB液，室温放置10min，未与蛋白

3、结合的SRB用1%醋酸洗5遍，空气干燥，结合的SRB用150μl10mmol/L非缓冲Tris碱液（pH10.5）溶解，酶标仪检测550nm波长光密度并计算抑制率，实验重复3次。2.3HL60细胞克隆形成实验［4］参照文献配制半固体培养基，HL60细胞经不同浓度硒化壳聚糖作用48h后，PBS洗去药物，离心1000r/min×3min，用含20%小牛血清的RPMI-1640完全培养液稀释为7.0×103个/ml单细胞悬液,于24孔塑料培养板预加1.2%甲基纤维素培养基1.0ml/孔，加入单细胞悬液50μl，使每孔细胞数为350个,每个浓度设4个复孔。混匀后置37℃，5%C

4、O2，饱和湿度的培养箱中孵育10～12d后于倒置显微镜下计数细胞克隆数，计算细胞存活率（给药组平均克隆数/对照组平均克隆数×100%）,实验重复3次。2.4流式法检测细胞凋亡及周期阻断作用HL60细胞经不同浓度硒化壳聚糖作用48h后，收集细胞，加70%乙醇1ml，-20℃固定24h，加入ＰＩ(终浓度为50μl/ml)和ＲＮＡ酶(终浓度为0.25mg/ml)，室温下避光孵育30min，用流式细胞仪作DNA分析，以ModFitLT软件分析，拟合计算各时相细胞的百分比。2.5期）细胞无明显改变（P＞0.05）。结果见图1和表2。表2硒化壳聚糖对HL60细胞周期时相的影响（略）

5、3.3硒化壳聚糖对HL60细胞odrzjeedicineandbiomedicalengineering［J］.PolimMed.,2003,33(1-2):47.［2］孙兰萍,张胜义,许晖.硒化壳聚糖的制备及理化性质的研究［J］.食品工业科技,2006,27(2):145.［3］李柱来,.freelandloammarytumordevelopmentandgroalemice［J］.BiolTraceElemRes,2008,25(3):268.［6］大星章一,管野晴夫，吴政安，等.癌细胞的增殖与分化［M］.北京：科学出版社1979:219.［7］魏丽惠.体外人癌细

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