人巨细胞病毒体外感染诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡论文

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1、人巨细胞病毒体外感染诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡论文【摘要】本研究探讨人巨细胞病毒(hCMV)体外感染是否可引起早幼粒细胞的增殖、分化抑制、诱导其凋亡，并探讨其作用机制。采用hCMVAD169株体外感染早幼粒细胞白血病细胞HL60，用PCR检测hCMVDNA，用形态学观察、DNA片段化检测及AnnexinⅤ/PI染色流式细胞仪检测等方法分析细胞凋亡情况。结果表明：hCMVAD169株在体外能明显抑制早幼粒细胞白血病细胞HL60的生长，抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；PCR检测发现病毒感染组HL60

2、细胞中有hCMVIEA的表达；形态学观察和DNA片段化检测证实了细胞凋亡的存在；流式细胞仪检测结果显示HL60细胞凋亡率随培养液中病毒浓度的加大和感染时间的延长而增高，二者呈依赖关系。结论：hCMVAD169株在体外可直接感染HL60细胞；hCMVAD169株在体外感染HL60细胞后，可抑制HL60细胞的分化和增殖；hCMVAD169株体外感染HL60细胞后可诱导其凋亡，且凋亡率与病毒剂量及作用时间呈依赖性关系。【关键词】人巨细胞病毒早幼粒细胞白血病细胞细胞凋亡病毒感染HumanCytomegalo

3、virusInducesApoptosisofHumanPromyelocyticLeukemicCellsviaDirectInfectionInVitroAbstractThestudyancytomegalovirus(hCMV)onhumanpromyelocytecelllineHL60,andtostudyechanism.PromyelocytecelllineHL60andhCMVAD169strainorphologicobservation,DNAladderformation,flo

4、etryedbymorphologicobservationandDNAladderformation.Theresultsoffloetryshoeafterinfection.ItisconcludedthatthepromyelocytecanbeinfecteddirectlybyhCMVAD169strain.hCMVAD169straininhibitedthedifferentiationandproliferationofpromyelocyte.TheapoptosisofHL60cell

5、scanbeinducedbyhCMVinfection.Vinfection.Keyancytomegalovirus;promyelocyticleukemiccell;apoptosis;virusinfection人巨细胞病毒（hCMV）是一种在人群中广泛存在的病毒，儿童是其原发感染的最主要的人群，受感染者的造血、血液系统是主要受累部位之一［1］。对hCMV感染的研究，特别是对于器官移植后hCMV感染的研究，一直是国际上医学界关注的热点。如今，hCMV感染已被认为是骨髓移植和白血病化疗失败的主要原因之

6、一［2］。国内外学者对hCMV和造血细胞作用的研究多集中于CFUGM、CFUE、CFUMix及CFUMK方面，实验证实hCMV对各系造血祖细胞的分化和增殖均有抑制作用［2，3］。hCMV是否能诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡的问题尚无定论，国内尚未有类似研究报道。本实验采用hCMV体外感染早幼粒细胞白血病细胞系HL60，研究hCMV对早幼粒细胞白血病细胞的影响，并初步探讨其作用机制。病毒hCMVAD169株取自华中科技大学附属同济医院儿科病毒实验室，效价为2×107pfu/ml，应用前部分病毒原液用单倍

7、RPMI1640培养液稀释10倍、100倍、1000倍，依次获取效价为10-1hCMV原液组，10-2hCMV原液组，10-3hCMV原液组的病毒液。细胞株早幼粒细胞白血病HL60细胞株由香港中文大学儿科系实验室馈赠，用含10%FBS的RPMI1640培养液于37℃、5%CO2条件下常规培养，每周换液3次，传代1次。取对数增殖期细胞用于实验。主要试剂RPMI1640培养液粉剂是美国Invitrogen公司产品（批号1165062）。hCMV检测试剂盒购于华美生物工程公司。DNA抽提试剂盒（K201型）购于上

8、海申能博彩生物科技有限公司。AnnexinV/PI双标试剂盒购于BectonDickinsonBiosciences公司。感染与分组病毒感染采用持续性感染方式，即将hCMV直接加入培养体系中混合培养。实验共分4组，即对照组(含10%FBS的RPMI1640培养液，不加病毒)、10-1hCMV组（10-1组）、10-2hCMV组（10-2组）、10-3hCMV组（10-3组）。hCMV的PCR检测分别