elisa检测p24抗原用于诊断hiv感染的研究现状论文

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1、ELISA检测p24抗原用于诊断HIV感染的研究现状论文［关键词］ELISA；p24；HIV1HIV感染实验诊断的研究概况HIV主要通过性接触、血液和母婴传播。近年来，欠发达国家的感染人数超过发达国家。预计到2010年我国感染HIV的人数将超过1000万。目前测定血清HIV抗体是诊断HIV感染的常规实验方法，但是测定HIV抗体有局限性：有超过70%的HIV感染者在感染6个月后才能检测出抗体，在同性恋群体，这个数字超过80%，检测技术增加了HIV“窗口期”传播的危险［1］；新生儿产生抗体需要出生1年后，来自母亲的H

2、IV抗体会致使假阳性产生；HIV抗体持续存在，艾滋病晚期时消失.freeleLabelledAntigenSpotTest,ELAST）能显著提高ELISA实验的敏感度和特异度。3.1实验步骤患者血浆用0.5%三硝基甲苯稀释至1∶6比例后100℃加热5min。已知浓度0pg/ml、0.5pg/ml、1pg/ml、2.5pg/ml、5pg/ml、20pg/ml、40pg/ml、80pg/ml的p24抗原作为对照同时操作。所有标本（100μl/份）加入微孔中37℃孵育60min后，用稀释的磷酸盐缓冲液（PBS）洗板后

3、，加入100μl用辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗p24抗体，再37℃孵育60min。洗板后，来自ELASTELISA系统的100μl生物素酪胺加入微孔中，室温下孵育60min。再次洗板后，来自ELASTELISA系统的链霉素辣根过氧化物酶用1%小牛血清PBS吐温20ml溶液稀释至1∶500，取100μl加入每个孔中，室温下孵育30min后洗板。100μl四甲基联苯胺底物加入微孔中，室温下孵育30min。然后加入100μl1mol/L的硫酸终止显色反应。15min内450nm测定吸光度，当吸光度＞0.12时被

4、认为是阳性［3］。3.2敏感度和特异度SutthentR等发现采取ELASTELISA方法测定血浆p24的线性范围是0.5pg/ml～80pg/ml。针对新生儿感染HIV的检测，p24检测的敏感度(100%)与HIV1RNA检测的敏感度相同，高于检测HIV1DNA（61.9%），三种方法的特异度都可达100%［3］。SchupbachJ等研究390例HIV感染母亲生产的婴儿，发现经过中和抗体，p24检测的特异度可达100%，在125例感染HIV的儿童中，p24检测敏感度可达97%高于PCR检测HIVDNA（9

5、6%）和病毒培养结果（77%）。普通采用免疫复合物分离技术测定p24抗原的方法敏感度低，而且只能检出50%没有症状的HIV患者。如今已有商品化试剂盒（bioMerieux）采用ELASTELISA方法检测p24抗原，其敏感度和特异度能和PCR检测HIV1RNA相媲美。4检测p24抗原的方法临床价值评判4.1p24抗原用于HIV1的早期诊断成人HIV感染至抗体阳转需要6个月时间［1］。p24抗原在感染早期，病毒大量复制而抗体产生很少时就能被检测出来［4］。通过检测血浆p24抗原，可以将“窗口期”减短至20d，此

6、时抗体尚为阴性［5，6］。因此对献血员进行p24抗原筛查很有必要性。美国FDA已规定,.freell的浓度，相当于每毫升有100个病毒，而HIV1RNA检测正常低限是小于400拷贝/ml。故ELASTELISA测p24抗原的阈值小于测定HIV1RNA，并且两种方法的敏感度和特异度都相同。相比之下，p24抗原更适合作为治疗何时开始以及治疗是否有效的标志物。美国艾滋病临床实验组认为，血浆p24浓度下降一半表明抗病毒治疗有效，p24浓度持续升高表明缺乏有效治疗［2］。5前景与问题目前临床可以用于检测HIV感染，并监

7、测疾病进展的方法有：HIV抗体检测、p24抗原检测、HIV核酸检测以及T淋巴细胞计数。总的来说ELISA检测抗体和p24抗原的方法是比较经济，省时，同时也比较节省人力资源的。由于献血者需要同时作HIV抗体和p24抗原检测，比较费时，国外已有第四代HIV1抗体/HIV2抗体/p24抗原联合检测HIV的商品试剂盒。两项检测同时进行，大大减少了时间，尤其适用于大标本量的筛查。HIV病毒致病机制主要是蛋白的作用，而非RNA，所以检测p24抗原能比检测HIVRNA直观地预测爱滋病进展。ELASTELISA测定血浆p24

8、抗原作为一种操作简单、经济、省时高效的实验方法，具有良好的敏感度和特异度，检测阈值较HIV1RNA检测还低。可以作为抗体阴性的疑似HIV感染者的检测，献血者的筛查，HIV感染母亲生产婴儿的检测以及决定何时开始治疗和抗病毒治疗是否有效的监测指标。主要存在的问题：现在对于p24抗原的研究集中于B亚型，Bonard等研究发现在非洲HIV1CRF02_AG株感染患者中，当RN