hiv-1 p24抗原检测方法研究进展

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1、HIV-1P24抗原检测方法研究进展关键词：HIV-1P24抗原；酶免疫测定法；检测方法今年是世界艾滋病流行以来的第33个年头,全球艾滋病流行与防治形势都发生了巨大的变化。自上世纪九十年代中期高效联合抗逆转录病毒治疗（highlyactiveantiretroviraltherapy,HAART）技术应用以来,成千上万的艾滋病病人得到有效治疗。然而，由于HIV本身的高变异率，导致临床上尚无有效的根除HIV的治疗方法。因此，对艾滋病的防控手段仍以预防为主。目前，对HIV感染的检测方法包括抗体检测、P24抗原检测、核酸检测以及CD4+T淋巴细胞

2、水平检测等。由于从感染HIV到出现可检测的抗体尚有一段时间，因此虽然抗-HIV检测的ELISA试剂经历了4代发展[1]，但其“窗口期”问题仍不可避免；而可以进一步缩短“窗口期”问题的核酸检测和CD4+T淋巴细胞水平检测，由于其检测过程较复杂、耗时较长且需要特殊仪器而不易普及。HIV-1侵入人体后，核心抗原P24的水平随着病毒RNA水平的发展而发展，并在急性感染期即可出现，通常被认为是病毒复制的间接标志，与病情发展密切相关。因此，血液及其他体液标本中P24抗原的检测可以缩短窗口期，有助于HIV-1的早期诊断、预后判断及评价抗病毒治疗的效果，具

3、有良好的实际应用价值。1P24抗原的生物学特性HIV属于逆转录病毒科慢病毒属中的人类慢病毒组，为直径约100-120nm的球形颗粒，由核心和包膜两部分组成。核心包括两条单股RNA链、核心结构蛋白和病毒复制所必须的酶类，包括逆转录酶（RT,P51/P66），整合酶（INT,P32）和蛋白酶（PI，P10）.核心外面为病毒衣壳蛋白（P24，P17）.病毒的最外层为包膜，其中嵌有gp120(外膜糖蛋白)和gp41(跨膜糖蛋白)两种糖蛋白。HIV基因全长约9.8kbp,含有3个结构基因（gag,pol和env）、2个调节基因（tat反式激活因子、r

4、ev毒粒蛋白表达调节因子）和4个辅助基因（nef负调控因子、vpr病毒r蛋白、vpu病毒u蛋白和vif毒粒感染性因子）。HIV变异性很强，各基因的变异程度各不同。其中以env基因的变异率最高，gag和pol基因相对保守。Gag基因编码55kd的前体蛋白，在pol基因编码的蛋白酶的加工下产生P17、P24和P55蛋白，因此P24蛋白氨基酸顺序高度保守，这使其在HIV-1感染的检测中显示良好的规律性。2P24抗原的检测方法2.1ELISA检测P24抗原目前，商品化的P24抗原检测试剂盒都是依据夹心Elisa。首先以P24单克隆抗体包被微孔板，加

5、人待检标本孵育，待检标本中若存在P24抗原，则被“捕捉”结合于包被抗体，然后依次加入生物素化的抗．HIV多克隆抗体、链亲合素化的辣根过氧化物酶和反应底物显色，最后用酶联免疫检测仪测定OD值判断结果。标准P24抗原检测方法的阳性检出率相对较低，在无症状携带者中通常仅为8％一10％，在艾滋病相关综合征(AIDS-relatedcomplex，ARC)患者中为12％，在AIDS患者中为37％一86％。这种低检出率可能与感染早期P24核心抗原量较少，以及在病情发展阶段P24抗原与抗体形成抗原抗体复合物阻碍了抗原的检测有关。改进标准的方法或设计新方法

6、，可以增强检测的敏感性，提高阳性检出率。目前开发的第4代H1V诊断试剂就是在第3代试剂的基础上，加入了HIV-1P24抗原检测系统，可同时检测血清／血浆中的HIV-1抗体和P24抗原，使诊断窗口期与第3代ELISA检测试剂相比，平均缩短了4d，使艾滋病早期诊断的效果明显优于第3代。既便如此，第4代试剂仍然有2-3周的诊断窗口期。此外，由于抗原和抗体同时包被在反应板上，存在着相互干扰的可能，影响了免疫反应的特异性，再加之第2窗口期的存在，影响了检测的敏感性。因此通常来讲，使用第4代试剂检测P24抗原，其灵敏度[(20-l00)pg/m1]远远

7、低于单独检测抗原抗体分析法[(3.5-10)pg/m1]。从方法学上来讲，这种基于ELISA的分析方法，灵敏度终归是有限的，相对化学发光和时间分辨荧光免疫分析技术等更为先进的分析方法，其灵敏度仍较低[2-5]。2.2P24抗原检测的新方法由于ELISA本身的局限性以及P24抗原检测在HIV-1诊断中的重要作用，近几年来国内外对建立高灵敏度检测P24抗原的研究一直就未曾停止过。先后研发了免疫复合物解离P24抗原测定法(immune-complexdisassociate，ICD)，信号放大增强ELISA(signal-amplificatio

8、n-boostedELISA)，超敏感酶免测定法(ultrasensitiveenzymeimmunoassay，UEI)，免疫吸附电镜法(immunosorbente1ectr