帕金森病病人usp24基因外显子39～68突变筛查论文

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1、帕金森病病人USP24基因外显子39～68突变筛查论文莫晓云迟静薇李小平鹿丽娜郭辉李薇凌捷许小娟谭洁琼胡正茂唐北沙夏昆【摘要】目的对帕金森病(PD)病人泛素特异性蛋白酶24(USP24)基因的外显子(exon)39～68进行突变筛查，以进一步了解USP24基因是否为PD的致病基因。方法对中国湖南省92例散发PD病人USP24基因的exon39～68通过PCR产物直接测序法进行突变筛查。结果在exon39～68中未见任何碱基变异，在外显子内含子交界区检测出11种变异，其中3种为已知多态(rs6588545、rs12031876和rs10493176)，位于exon59的c.7078+22

2、ag变异仅在1例以强直为主要临床症状的早发男性PD病人中存在，在95例正常人中不存在此变异。结论在湖南地区的中国人群中，USP24基因位于exon39～68的基因突变可能在PD的发病机制中不起主要作用。【关键词】帕金森病;USP24基因;突变ABSTRACTObjectiveToscreentheexon39-68ofUSP24geneinpatientsorphisms(rs6588545,rs12031876andrs10493176).Themutationlocatingatc.7078+22agofexon59alepatientainclinicalsymptomofstiff

3、ness,thisvariationalpersons.ConclusionThemutationlocatinginexon39-68ofUSP24geneseemsnottoplayaprincipalroleinpathogenesyofParkinsondiseaseinChinesepopulationofHu′nanregion.KEYgCl20.5μL，补去离子水至10μL。多数引物的PCR反应程序为：第一相循环，95℃预变性15min，94℃变性50s,65℃退火40s，72℃延伸50s，循环6次，每个循环退火温度下降1℃;第二相循环，94℃变性50s，60℃退火40s，7

4、2℃延伸50s，循环25次，72℃延伸5min。取PCR产物2.0μL用60g/L聚丙烯酰胺凝胶电泳40min，并银染检测，对扩增特异性好的PCR产物用虾碱性磷酸酶和核酸外切酶(Fermant公司)37℃酶切90min,80℃15min灭活虾碱性磷酸酶和核酸外切酶，将处理后的PCR产物使用3100基因分析仪(ABI公司)进行测序。测序结果用DNAStar软件中的SeqMan程序与参照序列(Genebankaccessionnumber：NM_015306.2)进行比对分析。1.3统计学分析使用SPSS13.0统计学软件包中的Fisher’sexacttest分析等位基因频率和基因型频率在两

5、组间的差别，以P0.05为差异具有显著性。2结果在30个外显子(exon39～68)中未发现任何碱基变异，仅在外显子内含子交界区检测到11种变异，见表2。其中，位于exon57的c.6882+71at，位于exon59的c.697639ct及位于exon65的c.752718ag的3个变异均为dbSNP数据库中已报道的SNP，其SNP分别是rs6588545、rs12031876和rs10493176，其余变异均为dbSNP数据库中未报道的变异。所有变异或多态在病人中均以杂合状态出现。PD病人中这3个位点的基因型及等位基因频率与dbSNP数据库报道的正常人的基因型及等位基因频率并没有

6、差别(见表3)。位于exon59的c.7078+22ag变异仅在1例以强直为主要临床表现的早发男性PD病人中检测到，在95例正常人中并未发现此变异。3讨论尽管PD的发病机制还不清楚，但目前认为遗传因素与环境因素的共同作用导致PD的发生。迄表2PD病人中USP24基因exon39～68突变检测结果外显子变异dbSNP数据库录入号变异频率表3PD病人与正常人中USP24基因rs6588545、rs120今，在基于家系连锁分析的基础上已定位了16个PD遗传易感位点，克隆了11个PD致病基因，如：SNCA4、Parkin5、LRRK26、Pink17以及ATP13A28等。已有研究结果证实，US

7、P24基因位于PARK10位点9。由于USP24基因是泛素特异性蛋白酶家族的成员，具有将多聚泛素从靶蛋白上移走，防止靶蛋白被蛋白酶降解的功能，而蛋白酶解及蛋白聚集是PD发病的重要机制，因此USP24基因有可能参与PD的发生。LI等2运用SNP进一步的病例对照研究结果显示，USP24基因与PD的发生有关。以上两项研究均提供了USP24基因可能参与PD致病的遗传学依据，但由于病例对照研究的结果并不精确，它提示真正的致病